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[發明專利]一種鎘-IgE螯合物及其制備方法和應用在審

專利信息
申請號: 201510412177.7 申請日: 2015-07-14
公開(公告)號: CN105037536A 公開(公告)日: 2015-11-11
發明(設計)人: 張積仁;陽帆;董欣敏;吳婧;蔡睿;孫遙;趙乙木 申請(專利權)人: 上海拜豪生物科技有限公司
主分類號: C07K16/00 分類號: C07K16/00;G01N33/68;G01N33/96
代理公司: 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙) 44288 代理人: 湯喜友
地址: 200000 上海市浦東新區中國(*** 國省代碼: 上海;31
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摘要:
搜索關鍵詞: 一種 ige 螯合物 及其 制備 方法 應用
【權利要求書】:

1.一種鎘-IgE螯合物,其特征在于,鎘離子與IgE通過巰基或/和半胱氨酸殘基螯合而成。

2.一種如權利要求1所述的鎘-IgE螯合物的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:

A)鎘與IgE的螯合反應:在提純源于人體的IgE或按照生物學方法重組的IgE中加入鎘離子進行螯合反應,得到反應溶液;

B)純化鎘-IgE螯合物的提?。翰捎妹庖哂H和層析法,去除反應溶液中未反應的IgE以及多余的鎘離子,即得鎘-IgE螯合物。

3.根據權利要求2所述的制備方法,其特征在于,

所述步驟B)具體如下:

(1)溶解樣品:向經過步驟A)得到的反應溶液中加入生理鹽水使鎘-IgE螯合物復溶;

(2)平衡層析柱:使用稀釋緩沖液沖洗層析柱的管路,在層析柱中裝入能與IgE特異性結合的填料,裝柱后,繼續使用稀釋緩沖液平衡層析柱;

(3)上樣:待層析柱平衡后,用稀釋緩沖液稀釋步驟(1)中樣品,然后上柱,IgE與填料特異性結合;

(4)洗脫:使用稀釋緩沖液沖洗層析柱至基線平衡,然后使用0.05-0.1mol/L的磷酸鹽溶液進行洗脫,得到洗脫液Ⅰ;

(5)收集:收集洗脫液Ⅰ;

(6)透析:將步驟(5)中的收集的洗脫液,裝透析袋,用ddH2O透析除鹽,換水三次后,4℃透析過夜,收集樣本;

(7)平衡層析柱:采用新的層析柱,用稀釋緩沖液沖洗管路,在該層析柱中裝入能與鎘特異性結合的填料,裝柱后再用稀釋緩沖液平衡層析柱;

(8)上樣:待層析柱平衡后,用稀釋緩沖液稀釋步驟(6)中樣本,然后上柱;

(9)洗脫:使用稀釋緩沖液沖洗層析柱至基線平衡,然后使用0.5-1.0mol/L的磷酸鹽溶液進行洗脫,得到洗脫液Ⅱ;

(10)收集:收集洗脫液Ⅱ;

(11)透析:將步驟(10)中的收集的洗脫液,裝透析袋,用ddH2O透析除鹽,換水三次后,4℃透析過夜,收集樣本,即得鎘-IgE螯合物。

4.根據權利要求2所述的鎘-IgE螯合物的制備方法,其特征在于,還包括步驟C):對鎘-IgE螯合物的鑒定;

其中,步驟C)中具體如下:

(1)制備膠床:以瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠中的一種作為介質制備膠床;

(2)加樣:取步驟B)中提取純化得到的鎘-IgE螯合物,加入稀釋緩沖液,并混勻,然后加樣于樣品槽中;

(3)電泳:連接電泳板,進行電泳;

(4)檢測:在膠床上找出含鎘的蛋白條帶,將該蛋白條帶取出并溶解,然后再采用ELISA法或ICP-MS法或AAS法檢測是否含有鎘以及檢測鎘的含量。

5.一種如權利要求1所述的鎘-IgE螯合物在制備檢測血樣中鎘-IgE螯合物的試劑或試劑盒中的應用。

6.一種至少包括如權利要求1所述的鎘-IgE螯合物作為標準品的試劑盒。

7.根據權利要求6所述的試劑盒,其特征在于,還包括包被液,該包被液含有捕獲IgE的物質或捕獲鎘的物質。

8.一種定量檢測鎘-IgE螯合物的方法,其特征在于,以已知含量的權利要求1所述的鎘-IgE螯合物作為標準品,采用以下方法之一對樣品進行檢測:酶聯免疫法、酶聯免疫與原子吸收光譜結合法、酶聯免疫與電感耦合等離子體質譜結合法、提純鎘-IgE螯合物與酶聯免疫結合法、提純鎘-IgE螯合物與原子吸收光譜結合法、提純鎘-IgE螯合物與電感耦合等離子體質譜結合法、電泳與酶聯免疫或原子吸收光譜或電感耦合等離子體質譜結合法。

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