技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種植物組織培養(yǎng)方法，具體涉及一種杜鵑花化學(xué)消毒組培方法，屬生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

杜鵑花屬(RhododendronLinn.)植物是世界著名的觀賞植物，是我國十大名花之一，也是世界著名觀賞花卉.其艷麗多彩的花色和得體的盆花造型一直占據(jù)著我國春節(jié)花卉熱銷品種之一。杜鵑花通常采用種子、扦插、壓條和嫁接方法繁殖,但受種類或品種、季節(jié)、母株材料等因素限制，難于進(jìn)行大量的商業(yè)化生產(chǎn)。自1975年Anderon首次成功地建立了山杜鵑(Rhododendron?xx)的離體培養(yǎng)體系，組織培養(yǎng)已成為杜鵑花繁殖的重要手段，廣泛應(yīng)用于種質(zhì)資源保護(hù)、遺傳育種和無性系苗木的商業(yè)化生產(chǎn)中。對(duì)于特定的杜鵑花種類、品種，其離體繁殖成功的關(guān)鍵在于基本培養(yǎng)基的選擇，在外植體的誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)中對(duì)所添加激素種類及配比的優(yōu)化，以及對(duì)馴化移栽中環(huán)境因子的調(diào)控。但是，由于杜鵑花種類和品種間的差別，在組織培養(yǎng)過程中繼代增殖培養(yǎng)、誘導(dǎo)生根、組培苗的馴化移栽體系的建立，仍是組織培養(yǎng)中急需解決的問題，特別是叢生芽和不定芽分化率低的問題,是組培快繁的瓶頸。

杜鵑組織培養(yǎng)，一方面可以擴(kuò)大其繁殖系數(shù)，從而實(shí)現(xiàn)規(guī)模化繁殖；另一方面，可以在保存其原有的優(yōu)良性狀的基礎(chǔ)上，實(shí)現(xiàn)杜鵑的種質(zhì)資源保存和轉(zhuǎn)基因研究等。杜鵑組織培養(yǎng)的成本主要包括組培苗生產(chǎn)所需的培養(yǎng)基、設(shè)施設(shè)備、供電成本、耗材和人工成本。常規(guī)的杜鵑組織培養(yǎng)方法要求外植體接種在高溫高壓滅菌后的無菌培養(yǎng)基中才能正常生長，耗能大，人工操作成本高。如果能通過化學(xué)消毒的方法來改造培養(yǎng)基，使培養(yǎng)基在不需要進(jìn)行高溫高壓滅菌，就能夠獲得杜鵑的正常生長。這樣，一方面可以降低杜鵑組織培養(yǎng)對(duì)設(shè)施設(shè)備的要求，尤其不需要高溫高壓滅菌所需配置的高壓鍋設(shè)備，縮減了投資成本，電能消耗也將大幅度降低；另一方面，采用這種培養(yǎng)基開展杜鵑組織培養(yǎng)，組培環(huán)節(jié)大為簡化，人工操作的速度大幅提高，從而降低了人工成本。此外，由于改造后的培養(yǎng)基自身具有殺菌、抗菌或抑菌作用，能有效控制組織培養(yǎng)過程中的污染問題，又不會(huì)對(duì)杜鵑生長產(chǎn)生毒害或抑制，即不影響杜鵑的正常生長，從根本上簡化了杜鵑組織培養(yǎng)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種杜鵑花化學(xué)消毒組培方法。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。

本發(fā)明的一種杜鵑花化學(xué)消毒組培方法，包括培養(yǎng)容器消毒、培養(yǎng)基配制、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和瓶苗移栽，其特征在于：

1.培養(yǎng)容器消毒：將培養(yǎng)瓶瓶蓋及接種用的不銹鋼盤在100mg/L次氯酸鈉+2mg/L青霉素+100mg/L丙酸鈣的水溶液中浸泡不少于10h，保存?zhèn)溆茫?/p>

2.培養(yǎng)基配制：誘導(dǎo)培養(yǎng)基為ER+6～15mg/L?ZT+5～15mg/L?IAA+40～100mg/L次氯酸鈉+2～5mg/L青霉素+50～100mg/L丙酸鈣+20g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8；增殖培養(yǎng)基為：ER+1～3mg/L?ZT+0.5～1.0mg/L?IAA+40～100mg/L次氯酸鈉+2～5mg/L青霉素+50～100mg/L丙酸鈣+20g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8；生根培養(yǎng)基為1/2ER+0.5～1.5mg/LNAA+0.1～0.5IBA?mg/L+40～100mg/L次氯酸鈉+2～5mg/L青霉素+50～100mg/L丙酸鈣+20g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8；所述ER培養(yǎng)基為1965年，Eriksson公開的ER培養(yǎng)基；所述ZT為玉米素；所述NAA為〆-萘乙酸；所述IAA為吲哚乙酸；所述IBA為吲哚丁酸；配制培養(yǎng)基時(shí)，先稱各培養(yǎng)基配方中蔗糖和瓊脂粉，加培養(yǎng)基總體積1/2的自來水，加熱至瓊脂粉完全溶解，再按各培養(yǎng)基配方配齊其他原料后，定容、然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl調(diào)pH值至5.8，分裝到消毒過的培養(yǎng)容器中，封口，冷卻凝固后備用；

3.誘導(dǎo)培養(yǎng)：取健壯的杜鵑頂芽或花蕾，先自來水沖洗表面灰塵，剝?nèi)ネ獍皿w積比為75％酒精中浸2～3s，再用重量比為0.1％HgCl₂消毒6～10min，無菌水沖洗3～5次；在超凈工作臺(tái)上，剝?nèi)?～3層的苞片，切除基部褐化部分，接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，40d后形成若干小芽；培養(yǎng)室溫度為25～28℃，光照12h，光照強(qiáng)度為1200～1500lx；

4.增殖培養(yǎng)：將誘導(dǎo)培養(yǎng)的小芽轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中,30d后逐步誘導(dǎo)出叢生芽并發(fā)育成不具根的叢生芽苗；將叢生芽苗切成帶芽的莖段，轉(zhuǎn)接到新的增殖培養(yǎng)基中，每30d轉(zhuǎn)接一次；培養(yǎng)室溫度為25～28℃，光照12h，光照強(qiáng)度為1200～1500lx；