技術領域

本發明屬于基因工程領域，尤其涉及一種由H7亞單位抗原制成的疫苗以及在動物模型評價中的應用。

背景技術

H7N9型禽流感是一種新型禽流感，于2013年3月底在上海和安徽兩地率先發現。H7N9型禽流感是全球首次發現的新亞型流感病毒，尚未納入我國法定報告傳染病監測報告系統，并且至2013年4月初尚未有疫苗推出。被該病毒感染均在早期出現發熱等癥狀，至2013年4月尚未證實此類病毒是否具有人傳染人的特性。2013年4月經調查，H7N9禽流感病毒基因來自于東亞地區野鳥和中國上海、浙江、江蘇雞群的基因重配。截至2015年01月25日，全國已確診133人，37人死亡，76人痊愈。病例分布于北京、上海、江蘇、浙江、安徽、山東、河南、臺灣、福建、東莞、汕尾等地。

人感染H7N9禽流感潛伏期一般為7天以內。患者一般表現為流感樣癥狀，如發熱，咳嗽，少痰，可伴有頭痛、肌肉酸痛和全身不適。重癥患者病情發展迅速，表現為重癥肺炎，體溫大多持續在39攝氏度以上，出現呼吸困難，可伴有咳血痰；可快速進展出現急性呼吸窘迫綜合征、縱隔氣腫、膿毒癥、休克、意識障礙及急性腎損傷等。

目前尚未有快速、有效的疫苗來防止禽流感病毒傳播以及完整的動物模型評價方法。

發明內容

鑒于現有技術的存在問題，本發明所要解決的技術問題是提供一種H7亞單位抗原以及在動物模型評價中的應用。

本發明解決上述技術問題的技術方案如下：

一種H7亞單位抗原，所述H7亞單位抗原具有SEQ?ID?NO：1所示核酸序列。

進一步，所述H7亞單位抗原具有SEQ?ID?NO：2所示氨基酸序列。

一種H7亞單位抗原在動物模型評價中的應用，所述動物模型為小鼠或者雪貂。

本發明的有益效果是：本發明以H7亞單位抗原制備的疫苗具有穩定、快速、有效等優點。通過小鼠或者雪貂作為動物模型，可以準確、快速的評價制備的疫苗。本發明以H7亞單位抗原制備的疫苗能夠有效的預防小鼠、雪貂感染H7N9病毒，具有良好的應用前景。

附圖說明

圖1為本發明所述重組禽流感亞單位疫苗圖，泳道M為blue?plus2marker,泳道1-2為純化前的樣品，泳道3-4為流出液，泳道5-14為純化后的樣品；

圖2為本發明所述H7抗原樣品電泳圖，泳道M為blue?plus2?marker,泳道1-3為H7抗原樣品，泳道4為0.5微克牛血清白蛋白，泳道5為1.0微克牛血清白蛋白，泳道6為1.5微克牛血清白蛋白；

圖3為本發明所述重組禽流感亞單位疫苗血凝抑制試驗圖；

圖4為本發明所述重組禽流感亞單位疫苗對小鼠體重的影響結果圖。

具體實施方式

以下結合附圖對本發明的原理和特征進行描述，所舉實例只用于解釋本發明，并非用于限定本發明的范圍。

本發明所述的實驗方法若無特別說明均采用本領域的常規技術手段，可參見說明書或者分子生物學克隆指南第三版。本發明所使用的實驗試劑若無特別說明均為本領域的常規實際，市場上可以購買到。

實施例1培養病毒株A/Anhui/1/2013(H7N9),提取病毒株中的RNA

所述A/Anhui/1/2013(H7N9)來自中國疾控中心(CDC)。

將禽流感病毒株A/Anhui/1/2013(H7N9)取0.2mL接種于15日齡雞胚，37攝氏度培養40h，置于4攝氏度冰箱過夜，無菌收集尿囊液。取病毒尿囊液500mL4攝氏度條件下6000rpm離心20min收集上清,25000rpm離心2h超速離心，沉淀用5mLTEN重懸，用質量分數10％-40％的蔗糖梯度離心，35000rpm離心2h，收集質量分數30％-35％的病毒帶，透析脫糖，用無RNA酶的TE緩沖液懸浮，分裝，凍存。

利用QIANGEN?Rneasy?Mini?Kit試劑盒提取RNA，具體操作步驟參見說明書。

實施例2利用反轉錄PCR獲得cDNA

取RNA菌懸液10微升，加入20pmol引物1(如SEQ?ID?NO：3所示核酸序列)混勻后置于70攝氏度水浴中反應10min，再加入5*反轉錄酶緩沖液、0.1mol/LDTT2微升、2.5mmol/LdNTP?4微升、RNA酶抑制劑1微升、M-MLV反轉錄酶10U,37攝氏度水浴1h，97攝氏度作用10min。獲得cDNA。