1.一種檢測(cè)目的樣品中靶多核苷酸的存在和/或靶多核苷酸內(nèi)部序列變異的存在的方 法，包括步驟：

(i)提供包含兩個(gè)獨(dú)立的配偶體寡核苷酸組分的探針，所述兩個(gè)獨(dú)立的配偶體寡核苷 酸組分包括：

a)具有第一和第二區(qū)段的第一寡核苷酸，其中第一區(qū)段包含用至少一種目視可檢測(cè)標(biāo) 記物標(biāo)記并且不能夠與所述靶多核苷酸的核苷酸序列雜交的核苷酸序列；并且其中第二區(qū) 段包含能夠與所述靶多核苷酸的一部分序列雜交的核苷酸序列，第一寡核苷酸的所述第二 區(qū)段具有在25℃和50℃之間的解鏈溫度(Tm)；和

b)具有第一和第二區(qū)段的第二寡核苷酸，其中第一區(qū)段包含能夠與第一寡核苷酸的第 一區(qū)段的核苷酸序列雜交的核苷酸序列；并且第二區(qū)段包含能夠與靶多核苷酸的核苷酸序 列雜交的核苷酸序列，所述靶多核苷酸的核苷酸序列毗鄰于第一寡核苷酸的第二區(qū)段能夠 與之雜交的核苷酸序列，所述第二寡核苷酸的第二區(qū)段具有在40℃和70℃之間的解鏈溫度 (Tm)；

(ii)使目的樣品暴露于(i)的探針，從而在靶多核苷酸存在下，三重雜交事件可以發(fā) 生，所述三重雜交事件包括(a)第一寡核苷酸的第一區(qū)段與第二寡核苷酸的第一區(qū)段雜交； 和(b)第一寡核苷酸的第二區(qū)段和第二寡核苷酸的第二區(qū)段均與靶多核苷酸雜交；

(iii)檢測(cè)目視可檢測(cè)標(biāo)記物的變化，其中目視可檢測(cè)標(biāo)記物的變化表示存在靶多核 苷酸和/或靶多核苷酸內(nèi)部的序列變異；并且

(iv)使用解鏈曲線分析或復(fù)性曲線分析，分析目視可檢測(cè)標(biāo)記物的變化。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中第一寡核苷酸用至少一種目視可檢測(cè)標(biāo)記物內(nèi)部 標(biāo)記。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中第一寡核苷酸具有15個(gè)至40個(gè)核苷酸殘基之間 或20至30個(gè)核苷酸殘基之間的長度；和/或第二寡核苷酸具有20個(gè)至50個(gè)核苷酸殘基之間 或25個(gè)至40個(gè)核苷酸殘基之間的長度。

4.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中第一和第二寡核苷酸的第二區(qū)段與之雜 交的靶多核苷酸的核苷酸序列具有15個(gè)至50個(gè)核苷酸之間或25個(gè)至40個(gè)核苷酸之間的長 度。

5.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中靶多核苷酸和/或靶多核苷酸內(nèi)部的序 列變異僅在三重雜交事件已經(jīng)發(fā)生后是可檢測(cè)的。

6.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中第一寡核苷酸的第二區(qū)段和第二寡核苷 酸的第二區(qū)段與靶多核苷酸的連續(xù)序列雜交。

7.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的方法，其中第一寡核苷酸的第二區(qū)段和第二寡核 苷酸的第二區(qū)段與靶多核苷酸的非連續(xù)序列雜交。

8.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中第一寡核苷酸的第二區(qū)段的解鏈溫度 (T_m)在30℃和40℃之間；并且第二寡核苷酸的第二區(qū)段的T_m在50℃和60℃之間。

9.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中第二寡核苷酸的第二區(qū)段的靶多核苷酸的解 鏈溫度(T_m)大于第一寡核苷酸的第二區(qū)段的靶多核苷酸的T_m，以確保鑒定錯(cuò)配序列。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中第二寡核苷酸的第二區(qū)段的T_m比第一寡核苷酸的 第二區(qū)段高10℃。

11.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的方法，其中第二寡核苷酸的第二區(qū)段的靶多核 苷酸的T_m與第一寡核苷酸的第二區(qū)段的靶多核苷酸的T_m相同。