[發(fā)明專利]一種檢測豬鏈球菌2型和副豬嗜血桿菌的二重PCR方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410833477.8 | 申請日： | 2014-12-23 |
| 公開（公告）號： | CN104531871A | 公開（公告）日： | 2015-04-22 |
| 發(fā)明（設計）人： | 朱建國;韓少鵬;李成之 | 申請（專利權）人： | 上海交通大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/14;C12Q1/04;C12R1/465;C12R1/21 |
| 代理公司： | 上海新天專利代理有限公司 31213 | 代理人： | 張寧展 |
| 地址： | 200240 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檢測 鏈球菌 嗜血 桿菌 二重 pcr 方法 | ||
1.一種檢測豬鏈球菌2型和副豬嗜血桿菌的二重PCR方法，其特征在于，具體步驟如下：
(1)以豬鏈球菌2型莢膜多糖基因cps2J和副豬嗜血桿菌保守性基因片段16SrRNA作為二重PCR檢測靶點，合成擴增這些靶點基因的引物；
(2)將2對引物置于一個PCR反應體系中，擴增豬鏈球菌2型和副豬嗜血桿菌的基因片斷；
(3)通過瓊脂糖凝膠電泳檢測鑒定PCR擴增產物；其中：
擴增豬鏈球菌2型的上游引物的序列如SEQ?ID?NO：1所示；下游引物的序列如SEQ?ID?NO：2所示；
擴增副豬嗜血桿菌的上游引物的序列如SEQ?ID?NO：3所示；下游引物的序列如SEQ?ID?NO：4所示。
2.如權利要求1所述的二重PCR方法，其特征在于，步驟(2)中，PCR反應體系如下：cDNA模板1μl，2對上、下游引物各0.5μl，PCR?Mix?12.5μl，超純水補充至25μl；PCR反應條件：95℃預變性5min，進入95℃60s，59℃1min和72℃1min的循環(huán)，循環(huán)35次，最后72℃延伸5min。
3.如權利要求1所述的二重PCR方法，其特征在于，對實際樣品進行待測前處理時，將具有呼吸道癥狀和/或關節(jié)腫大的病豬肺組織和關節(jié)液直接接種于TSB培養(yǎng)基中，12h后取菌液作為提取豬鏈球菌2型和副豬嗜血桿菌DNA樣品，然后進行二重PCR檢測。
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