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[發(fā)明專(zhuān)利]一種人類(lèi)尿液中PCA3基因檢測(cè)方法和引物有效

專(zhuān)利信息
申請(qǐng)?zhí)枺?/td> 201410808977.6 申請(qǐng)日: 2014-12-19
公開(kāi)(公告)號(hào): CN104531863A 公開(kāi)(公告)日: 2015-04-22
發(fā)明(設(shè)計(jì))人: 錢(qián)學(xué)慶 申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人: 錢(qián)學(xué)慶
主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68;C12N15/11
代理公司: 北京和信華成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11390 代理人: 胡劍輝
地址: 200030 上*** 國(guó)省代碼: 上海;31
權(quán)利要求書(shū): 查看更多 說(shuō)明書(shū): 查看更多
摘要:
搜索關(guān)鍵詞: 一種 人類(lèi) 尿液 pca3 基因 檢測(cè) 方法 引物
【權(quán)利要求書(shū)】:

1.一組特異性擴(kuò)增PCA3mRNA和PSA?mRNA的引物,其特征在于:包含2組檢測(cè)PCA3mRNA和PSA?mRNA的PCR擴(kuò)增核酸引物,長(zhǎng)度為18-26bp,且分別特異性地?cái)U(kuò)增出如SEQ?ID?NO:1所示的PCA3mRNA部分序列中第66位到148位核苷酸;和如SEQ?ID?NO:2所示的PSA?mRNA部分序列中第101位到第165位核苷酸;

用于擴(kuò)增PCA3mRNA的核苷酸擴(kuò)增引物如下:

正向引物:如SEQ?ID?NO:3所示;

反向引物:如SEQ?ID?NO:4所示;

熒光探針:如SEQ?ID?NO:5所示;

用于擴(kuò)增PSA?mRNA的核苷酸擴(kuò)增引物如下:

正向引物:如SEQ?ID?NO:6所示;

反向引物:如SEQ?ID?NO:7所示;

熒光探針:如SEQ?ID?NO:8所示。

2.一種人類(lèi)尿液中PCA3基因檢測(cè)方法,其特征在于:使用權(quán)利要求1所述的引物對(duì)人類(lèi)尿液細(xì)胞總RNA進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng),通過(guò)反應(yīng)Ct值測(cè)定PCA3mRNA和PSA?mRNA表達(dá)水平。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)方法,其特征在于:包括步驟:尿液采集、保存、總RNA提取、PCA3熒光定量PCR反應(yīng)和結(jié)果分析。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)方法,其特征在于:包括步驟:

(1)在初段尿液收集前列腺細(xì)胞;

(2)離心收集尿沉渣,并加入Trizol試劑保存;

(3)用氯仿,異丙醇方法提取前列腺細(xì)胞中總RNA,經(jīng)乙醇洗滌,棄上清后干燥、溶解并測(cè)定濃度;

(4)經(jīng)過(guò)37℃逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)1小時(shí),合成cDNA;

(5)用權(quán)利要求1所述的引物進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng),通過(guò)反應(yīng)Ct值測(cè)定PCA3mRNA和PSA?mRNA表達(dá)水平;根據(jù)公式PCA3評(píng)分=(PCA3mRNA/PSA?mRNA)X?1000計(jì)算測(cè)試樣品中尿PCA3分?jǐn)?shù)。

5.一種用于前列腺癌診斷的試劑盒,其特征在于:包含:

(1)收集含有前列腺細(xì)胞的尿沉渣的試劑和用具;

(2)尿液中總RNA提取試劑;

(3)檢測(cè)PCA3和PSA基因表達(dá)的試劑,其中含有權(quán)利要求1所述的引物;

(4)樣品中尿PCA3分?jǐn)?shù)的計(jì)算公式:PCA3評(píng)分=(PCA3mRNA/PSA?mRNA)X?1000。

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