技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種生物轉(zhuǎn)化“菌絲體”(正文中的引號表示對菌絲體的特指)及其提取物在制備抗凝血藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

血液凝固(blood?coagulation)是指血液由流動的液體狀態(tài)變成不能流動的凝膠狀態(tài)的過程，是生理性止血過程的重要環(huán)節(jié)。血液凝固的實(shí)質(zhì)就是血漿中的可溶性纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成不溶性的纖維蛋白的過程。當(dāng)形成的纖維蛋白交織成網(wǎng)時，可把血細(xì)胞及血液的其他成分網(wǎng)羅在內(nèi)，從而形成血凝塊。血液凝固是一系列復(fù)雜的酶促反應(yīng)過程，需要多種凝血因子的參與。凝血酶原的激活是在凝血酶原酶復(fù)合物作用下進(jìn)行的。因此，凝血過程可分為凝血酶原酶復(fù)合物的形成、凝血酶原激活和纖維蛋白生成三個基本過程。凝血酶原酶復(fù)合物的形成有內(nèi)源性凝血和外源性凝血兩條途徑。

內(nèi)源性凝血途徑當(dāng)血液與帶負(fù)電荷的膠原蛋白(皮膚血管外壁)或異體表面(如高嶺土、玻璃等)接觸時，因子Ⅻ就由酶原激活成Ⅻa，后者除能激活因子Ⅺ外,又同時使血漿前緩激肽釋放酶激活。激活后的激肽釋放酶在高分子量激肽原的促進(jìn)下反過來又進(jìn)一步使因子Ⅻ激活，但此時不再是接觸激活而是肽鍵水解激活,使成為因子Ⅻf。這是一正反饋效應(yīng),不論Ⅻa或Ⅻf都具有相同的活力。激活后的Ⅻa在Ca²⁺存在下接著又使因子Ⅸ激活?；罨囊蜃英鵤在Ca²⁺與磷脂存在下與因子Ⅷ形成復(fù)合物,使因子Ⅹ激活為因子Ⅹa。激活后的因子Ⅹ與Ca²⁺、磷脂及因子Ⅴ共同形成一復(fù)合物，后者最終使凝血酶原激活為凝血酶?；罨哪改苁箍扇苄岳w維蛋白原轉(zhuǎn)變成不溶性的纖維蛋白。本次采用的體外試管法測定凝血活性，原理也即家兔全血接觸玻璃試管后，啟動內(nèi)源性凝血通路，最終導(dǎo)致血凝塊的形成。

外源性凝血途徑體內(nèi)組織損傷時釋放出因子Ⅲ，也稱為組織因子。在Ca²⁺存在下它能與血液中已活化的因子Ⅷ形成復(fù)合物，就能使因子Ⅹ激活，此后就與內(nèi)源性激活途徑的反應(yīng)步驟相同。通過外源性途徑血液凝固在10多秒鐘內(nèi)即可完成，而通過內(nèi)源性途徑則需數(shù)分鐘。

地龍(Geosaurus)，為環(huán)節(jié)動物門鉅蚓科動物參環(huán)毛蚓、通俗環(huán)毛蚓、威廉環(huán)毛蚓或櫛肓毛蚓的干燥體，在《本草綱目》稱之為具有通經(jīng)活絡(luò)、活血化瘀、預(yù)防治療心腦血管?疾病作用。地龍能制備出含多種纖溶酶和纖溶酶原激活物的制劑，具有良好的溶解血栓作用，可使兔血漿組織型纖溶酶原激活物(t～PA)活力增加，血小板聚集性顯著降低，全血粘度和血漿粘度降低，紅細(xì)胞剛性指數(shù)降低，提示其通過促進(jìn)纖溶、抑制血小板聚集、增強(qiáng)紅細(xì)胞膜穩(wěn)定性等發(fā)揮作用。蚯蚓干粉水浸液在體外對家兔纖維蛋白和凝血塊均有溶解作用。家兔靜注水煎醇沉注射液對耳緣靜脈血栓有明顯溶解作用。正常志愿者口服蚯蚓提取物亦有明顯的抗凝和纖溶作用，且與劑量相關(guān)。凝血活酶時間明顯延長，纖溶酶原激活物活性增強(qiáng)，代球蛋白溶解時間縮短及纖維蛋白降解產(chǎn)物含量增加。從蚯蚓提取的纖溶酶(凍干粉)給家兔灌胃，0.05g/(kg·d)或0.1g/(kg·d)，連續(xù)3d，從心臟取血，在體外形成的血栓長度、濕重、干重均較對照組明顯減少。

猴頭菌絲體中的活性物質(zhì)最重要的是多糖及糖蛋白，目前國內(nèi)外對猴頭多糖的研究表明，猴頭菌多糖具有多種生物活性和藥理作用，能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬功能，促進(jìn)溶血素的形成，抗白細(xì)胞下降，降血糖、抗凝血、抗血栓、抗突變和抗衰老等。因此，猴頭菌多糖備受人們關(guān)注，成為近年來分子生物學(xué)、醫(yī)藥、食品科學(xué)等領(lǐng)域研究和開發(fā)應(yīng)用的熱點(diǎn)?！逗鲜≈兴幉臉?biāo)準(zhǔn)》2009年版，122～123頁記載了猴頭菌培養(yǎng)物，本發(fā)明所述的猴頭菌絲體是該標(biāo)準(zhǔn)記載的猴頭菌培養(yǎng)物。

生物轉(zhuǎn)化“菌絲體”是指利用菌絲體(包括真菌)的代謝功能，使有機(jī)物分解的生物化學(xué)反應(yīng)過程。以適宜的培養(yǎng)基為營養(yǎng)，通過菌絲體的生長代謝和生命活動產(chǎn)生豐富的次生代謝產(chǎn)物。借鑒中醫(yī)藥組方思想，將單味中藥、具有類似或協(xié)同作用的中藥作為部分培養(yǎng)基進(jìn)行菌絲體轉(zhuǎn)化，目的是產(chǎn)生新化合物、增強(qiáng)功效或者降低單一藥物不良作用。

據(jù)文獻(xiàn)記載，猴頭菌絲體具有抗凝血作用，但作用并不明顯，而地龍的很多抗凝血活性物質(zhì)均為酶類，現(xiàn)有的處理方法制備的地龍中藥材無論是加工過程還是保存條件都大大損害了其中的酶活物質(zhì)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種生物轉(zhuǎn)化“菌絲體”及其提取物。

所述一種生物轉(zhuǎn)化“菌絲體”的培養(yǎng)基包括如下重量份的組分：

麥麩65～75；玉米面15～25；谷糠7～11；白糖0.8～1.2；地龍25～150；水68.75～150。