技術領域：

本發明屬于生物化學中的多肽藥物技術領域，具體涉及紅瘰疣螈皮膚修復肽cathelicidin-TV2在促進皮膚修復、減少疤痕、加快疤痕修復的應用。

背景技術：

皮膚是機體與外界接觸的第一道屏障，是機體免于脫水、損傷、感染的第一道防線，是維持內環境穩定和阻止微生物、化學物質等侵入的屏障。炎癥、潰瘍、嚴重燒傷、創傷、腫瘤術后以及先天性畸形等多種急慢性損傷引起的大面積的皮膚缺損和難愈性皮膚潰瘍，會引發許多局部與全身各系統的反應。皮膚缺損后細菌極易入侵繁殖，會引起機體水電解質紊亂、敗血癥休克、高代謝反應、多臟器功能衰竭等，使機體不能維持正常的自穩狀態，甚至導致死亡。慢性皮膚潰瘍的預后很差，其危害已不容忽視。由于該病慢性遷延、難以治愈且消耗甚大，給患者造成了很大的心理壓力，嚴重影響患者的身體狀況及生活質量。因此，開發出安全高效的促皮膚愈合藥物，減少其發病率、降低其致殘率、死亡率，從而減輕由此而產生的社會問題，提高廣大患者的生活質量，已成為當前醫藥企業和科研工作者亟待解決的問題。

發明內容：

本發明的目的在于提供紅瘰疣螈皮膚修復肽cathelicidin-TV2在制備治療體表創傷、減少疤痕產生、加快疤痕修復藥物中的應用。

本發明的紅瘰疣螈皮膚修復肽cathelicidin-TV2采用常規的化學合成的方法獲得；紅瘰疣螈皮膚修復肽cathelicidin-TV2的分子量為1631.98Da，等電點為11.02，其全序列一級結構為RKCVRQNNKRVCK。

本發明的紅瘰疣螈皮膚修復肽cathelicidin-TV2在制備治療體表創傷、減少疤痕產生、加快疤痕修復藥物中的應用。

本發明的紅瘰疣螈皮膚修復肽cathelicidin-TV2，是由紅瘰疣螈皮膚肽Tylotoin改造而來的皮膚修復肽，其在細胞和小鼠的動物模型上試驗(試驗方案為常規方法)的具體步驟如下：

1.細胞增殖活性檢測:MTT法檢測樣品對HUVEC，NIH₃T₃，HaCAT細胞增殖的影響

將HUVEC，NIH₃T₃，HaCAT分別于含有10％胎牛血清以及雙抗(青霉素和鏈霉素各100U/ml)的DMEM培養液中培養，待長滿培養瓶后，將細胞用含0.02％EDTA的0.25％胰酶消化后稀釋成濃度為5×10⁴個/ml的細胞懸液。取96孔細胞培養板，每孔中加180μl細胞懸液，在37℃，5％CO₂培養箱中培養5-6h讓細胞貼壁后，每孔加入用DMEM培養液稀釋成不同濃度的待檢測樣品20μl，每個濃度作5個重復，空白對照加同樣體積的DMEM培養液，培養24h后，每孔加入5mg/ml?MTT(用細胞培養PBS緩沖液配制)染液20μl，孵育4h，能觀察到藍紫色結晶物。吸出培養液，每孔加150μl?DMSO，在振蕩器上振蕩混勻，讓結晶物充分溶解。于酶聯檢測儀上測定570nm處的光吸收值，參考波長為630nm。

2.細胞遷移活性

方法：采用細胞劃痕法。將對數生長期的HaCAT細胞，以0.25％胰蛋白酶消化，用含10％胎牛血清的培養液制成細胞懸液，按1×10⁶個/孔的密度接種到6孔板，置37℃，5％CO₂培養箱內培養至細胞完全長滿培養孔。吸棄培養液，PBS洗滌一次。用無菌槍頭在每個試驗孔中央垂直于培養孔自上而下劃一條線，為保證寬度一致，盡量均勻用力。洗去培養液，并用PBS吹洗幾次，洗去劃痕產生的細胞團，使劃痕邊緣整齊。吸除PBS后，加入無血清的新鮮培養基和適當濃度的樣品，顯微鏡下拍照后。繼續置于細胞培養箱中培養。培養過程中，每隔6個小時觀察一次，并拍照記錄。為保證每次拍照選擇的是相同的視野，接種細胞之前在每個培養孔底部用記號筆做好標記。所得圖像數據用Image?Pro?Plus?6.0分析處理。在劃痕每側邊緣均勻選取30個點后取其中線代表劃痕邊緣，測量劃痕間距，并用以下公式計算劃痕修復率：劃痕修復率＝(0h劃痕寬度-24h劃痕寬度)/0h劃痕寬度。實驗重復三次。

3.皮膚創傷修復動物實驗

1.實驗分組:選用6-8周，25g左右雄性昆明小鼠，隨機分4組(每組10只)：Cathelicidin-TV2和control組、Cathelicidin-TV2和EGF組。