技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)療領(lǐng)域，尤其涉及一種IL-31診斷試劑盒和使用該IL-31診斷試劑盒鑒別結(jié)核病與腫瘤的方法。

背景技術(shù)

胸腔積液可由多種疾病引起，胸腔積液常見(jiàn)的原因主要包括腫瘤性胸膜轉(zhuǎn)移和結(jié)核性胸膜炎及肺部炎癥所致。胸腔積液的病因診斷對(duì)胸腔積液治療方法的選擇具有極其重要的指導(dǎo)意義。

良惡性胸腔積液鑒別一直是臨床上的一個(gè)難點(diǎn)，惡性胸腔積液與結(jié)核性胸腔腹水的鑒別尤為困難，胸腔積液細(xì)胞學(xué)檢查找到腫瘤細(xì)胞對(duì)惡性胸腔積液有確診價(jià)值，但有時(shí)腫瘤細(xì)胞與炎性間皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等難以鑒別，同時(shí)還受診斷者水平和樣本采集等因素的影響，其敏感性僅40％-60％，結(jié)核性胸膜炎的診斷主要包括胸水生化檢查、結(jié)核菌素皮試(TST)、胸腔積液細(xì)菌學(xué)檢查(抗酸染色涂片和結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng))、胸膜組織病理活檢等。但上述檢查方法由于其特異性和敏感性均較低，不能滿足臨床工作需要，因此開(kāi)發(fā)新的快速診斷技術(shù)非常必要。

中國(guó)專利CN102230903A公開(kāi)了一種用于診斷癌性胸腔積液的小分子標(biāo)記物及其應(yīng)用，結(jié)合核磁共振技術(shù)和逐步判別函數(shù)分析法篩選出11個(gè)小分子標(biāo)記物，尤其乳酸鹽、乙酰乙酸鹽、氧化三甲胺、甜菜堿和α-葡萄糖這5個(gè)小分子標(biāo)記物，然而這些小分子標(biāo)記物是通過(guò)篩選方法確定，可能會(huì)存在漏檢、準(zhǔn)確率不高等問(wèn)題，而且無(wú)法對(duì)結(jié)核性胸膜炎進(jìn)行診斷。

結(jié)核性胸膜炎伴胸腔積液是臨床上最常見(jiàn)的肺外結(jié)核，結(jié)核分枝桿菌對(duì)胸膜的侵犯與遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)是結(jié)核性胸膜炎發(fā)病機(jī)制中的兩個(gè)重要環(huán)節(jié)。炎癥過(guò)程使胸膜血管通透性增加，富含蛋白質(zhì)和特異的淋巴細(xì)胞的液體聚集在胸膜腔中，在這一過(guò)程中多種T細(xì)胞亞群參與了結(jié)核性胸膜炎的免疫應(yīng)答反應(yīng)，包括Th1、Th2、Th9、Th17、Th22等，其分泌的IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、IL-22等參與結(jié)核的免疫應(yīng)答反應(yīng)。

白介素31(interleukin-31,IL-31)是2004年Dillon等新近發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子。初步研究證實(shí)，IL-31及其受體通過(guò)調(diào)節(jié)免疫、調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖等作用發(fā)揮其功能。目前研究認(rèn)為，IL-31是具有4個(gè)螺旋結(jié)構(gòu)的單鏈分子，主要由CD4+Th2細(xì)胞產(chǎn)生，在生理狀態(tài)下表達(dá)水平較低。IL-31是通過(guò)IL-31RA受體——GPL(gp130-like?receptor)與OSMR形成的異二聚體進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的。GPL屬于I型細(xì)胞因子家族，有研究報(bào)道在髓系單核細(xì)胞、皮膚、肺與前列的上皮細(xì)胞及激活的CD4+T細(xì)胞，均有IL-31RA表達(dá)。IL-31激活同時(shí)表達(dá)IL-31RA和OSMR的細(xì)胞；IL-31與IL-31RA結(jié)合后主要通過(guò)JAK-STAT通路、MPAK通路和PI3-kinase/AKT來(lái)進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)發(fā)揮效應(yīng)。IL-31受體主要分布在上皮細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，在皮膚及支氣管等組織中表達(dá)水平較高。在小鼠模型中發(fā)現(xiàn)，IL-31可負(fù)向調(diào)控CD4+Th2細(xì)胞因子的分泌。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，IL-31參與搔癢、禿發(fā)癥、皮膚損傷、氣道超敏反應(yīng)、特應(yīng)性皮炎、炎癥性腸病及自身免疫相關(guān)性疾病的發(fā)病過(guò)程。但I(xiàn)L-31在結(jié)核性胸膜炎免疫發(fā)病機(jī)制中作用及表達(dá)情況目前國(guó)內(nèi)外無(wú)相關(guān)研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為解決現(xiàn)有技術(shù)中的上述問(wèn)題提出的，其目的是提供一種利用IL-31診斷試劑盒鑒別結(jié)核病與腫瘤的方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

本發(fā)明的第一個(gè)方面是提供一種鑒別結(jié)核病與腫瘤的診斷試劑盒，該診斷試劑盒包括IL-31抗體，通過(guò)雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)檢測(cè)樣本中IL-31含量鑒別結(jié)核病和腫瘤。

優(yōu)選地，所述樣本為胸腔積液、腹腔積液等體內(nèi)積液中的任意一種或多種，更優(yōu)選為胸腔積液。

優(yōu)選地，所述診斷試劑盒包括IL-31捕獲抗體和檢測(cè)抗體，稀釋液、標(biāo)準(zhǔn)品、顯色液、終止液、底物、包被緩沖液、洗滌緩沖液中的一種或幾種。

優(yōu)選地，所述稀釋液包括牛血清白蛋白、冷害魚(yú)皮餃、硫柳汞、磷酸緩沖液中的一種或幾種。

優(yōu)選地，所述顯色液為辣根過(guò)氧化物酶。

優(yōu)選地，所述終止液為稀硫酸溶液。

優(yōu)選地，所述底物包括四甲基聯(lián)苯胺、磷酸棗檸檬酸、雙氧水、蒸餾水中的一種或幾種；所述包被緩沖液為磷酸鹽、碳酸鹽溶液中的一種或幾種；所述洗滌緩沖液包括磷酸鹽、氯化鈉、氯化鉀、吐溫-20、蒸餾水中的一種或幾種。

優(yōu)選地，所述診斷試劑盒還包括固體載體、封板膜。

優(yōu)選地，所述固體載體為96孔平底板。