技術領域

本發明涉及基因工程領域，具體地說，涉及豬BCL-XL基因在抗PRRS病毒中的應用。

背景技術

豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)，俗稱“藍耳病”是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的，該病毒是巢狀病毒目動脈炎病毒科的一個成員，同屬的病毒還有馬動脈炎病毒、鼠乳酸脫氫酶病毒和猴出血熱病毒。該病主要引起豬的繁殖與呼吸癥狀，表現為間質性肺炎和母豬流產木乃伊胎等，每年對全世界的養豬業造成了巨大的經濟損失。2007年在中國爆發了一場高熱病，該病迅速在全國范圍蔓延，超過200萬頭豬被感染，40萬頭豬死亡，該病最后證實是由一種高致病性的藍耳病毒引起的。PRRSV主要感染豬的肺泡巨噬細胞，現在研究表明在感染PRRSV后，先天免疫中PRRSV感染不能引起有效的I型干擾素應答，體液免疫不能及時產生有效的中和抗體，而且會形成抗體依賴的病毒增強效應，最終導致免疫抑制和持續感染。由于該病毒的突變率極高，傳統疫苗方法也不能有效控制該病，很多研究都致力于尋找RNAi、干擾素等新的方法來針對該病毒，用于彌補傳統方法的不足。

發明內容

本發明的目的是提供豬BCL-XL基因在抗PRRS病毒中的新用途。

為了實現本發明目的，本發明提供豬BCL-XL基因在抗PRRS病毒中的應用，其是通過豬BCL-XL基因的CDS序列在細胞中的過表達來抑制PRRS病毒在細胞中的復制。本發明中涉及的豬BCL-XL基因的CDS序列如下：

i)Seq?ID?No.1所示的核苷酸序列；或

ii)Seq?ID?No.1所示的核苷酸序列經取代、缺失和/或增加一個或多個核苷酸且表達相同功能蛋白質的核苷酸序列；或

iii)在嚴格條件下與Seq?ID?No.1所示序列雜交的核苷酸序列；

所述嚴格條件為在含0.1％SDS的0.1×SSPE或含0.1％SDS的0.1×SSC溶液中，在65℃下雜交，并用該溶液洗膜。

本發明還提供豬BCL-XL基因的表達載體，優選地，所述表達載體的出發載體為pCMV-Myc-N，在出發載體pCMV-Myc-N中導入豬BCL-XL基因的CDS序列。

本發明還提供含有上述表達載體的工程菌。

本發明還提供含有上述表達載體的轉基因細胞系。所述轉基因細胞來自除胚胎細胞外的豬體細胞。

本發明還提供一種制備克隆胚胎的方法，其是以上述轉基因細胞為核移植供體細胞，離體的卵母細胞為核移植受體細胞，通過核移植技術獲得克隆胚胎。

本發明還提供一種制備抗PRRS病毒轉基因豬的方法，其是將豬BCL-XL基因的CDS序列整合至豬基因組中，從而實現在豬中過表達BCL-XL基因。

本發明進一步提供一種篩選抗PRRS病毒豬的方法，即根據豬BCL-XL基因表達量篩選抗PRRS病毒豬。BCL-XL表達量高的豬比BCL-XL表達量低的豬具有更高的抗PRRS病毒感染能力。

本發明提供的與抗藍耳病相關的新基因BCL-XL屬于Bcl-2家族，它編碼的蛋白是一種位于線粒體膜上的跨膜蛋白。BCL-XL是一種重要的細胞凋亡信號通路調節因子，它可以通過抑制細胞的凋亡來增加細胞生存的時間。有研究表明，BCL-XL與HIV的感染，復制有關，但是目前沒有實驗表明，過表達BCL-XL會抑制PRRS病毒的復制。本發明首次發現，過表達BCL-XL可以顯著抑制PRRS病毒在MARC145細胞中的復制。

本發明發現的新的抑制PRRSV復制的豬BCL-XL基因主要包括以下兩個用途：

(一)可以通過對豬的BCL-XL基因的表達量的測定，篩選抗PRRS病毒豬。分析表明，相對于沒有過表達BCL-XL基因的細胞，過表達BCL-XL基因的細胞可以顯著抑制PRRS病毒的復制，因此，BCL-XL表達量高的豬可能會比BCL-XL表達量低的豬更加抗PRRSV的感染，從而達到根據BCL-XL基因的表達量高低來篩選抗PRRSV的豬。

(二)可以利用轉基因等基因工程技術手段，使得BCL-XL基因在豬中的表達量升高，從而得到BCL-XL表達量高的豬，進而培育出抗PRRSV的豬。

附圖說明

圖1為本發明實施例1中轉錄組數據分析得到的BCL-XL在通城豬和長白豬感染PRRSV的第0天、第3天、第5天和第7天肺組織中的表達模式和相對表達量；橫坐標代表時間點，縱坐標代表相對表達量(RPKM)。

圖2為本發明實施例2中原始載體pCMV-Myc-N的載體圖譜。