技術領域

?本發明涉及細胞生長因子技術領域，具體地說是一種用于骨折愈合過程中不同階段及不同細胞生長因子對促進骨折愈合的自體細胞生長因子制劑、制備方法及其制備用途。

背景技術

眾所周知，臨床上骨折延遲愈合及不愈合是臨床骨科常見的問題，通常解決的方法是切開植骨，植骨后再內外固定手術，植骨的方法有自體骨游離移植、吻合血管的骨及骨膜移植，以及異體骨等，上述方法都是通過二次手術植入固體的骨修復材料，需要切開手術，創傷大，對骨折局部血運損傷大，常常造成骨折的再次不愈合，臨床效果很差。像脛腓骨骨折手術治療的目的是使患者保持脛腓骨的穩定性，獲得最大限度的恢復小腿的承重功能，手術后，有一些患者由于自身原因或骨折處骨膜剝離過多或提前活動等原因會導致脛腓骨骨不連，目前，對脛腓骨骨不連采取的方法是二次手術，不但增加了患者的經濟負擔，而且還增加了患者的心理負擔。

發明內容

本發明的第一個目的是解決上述現有技術的不足，提供一種促進骨折愈合的自體細胞生長因子制劑。

本發明的第二個目的是提供一種促進骨折愈合的自體細胞生長因子制劑的制備方法。

本發明第三個目的是利用自體細胞生長因子制劑治療骨折愈合的用途，特別是治療脛腓骨骨不連的用途。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種自體細胞生長因子制劑，其特征在于組成成分是由多種細胞生長因子和強力霉素組成，所述多種細胞生長因子包括血管內皮細胞生長因子、轉化細胞生長因子和成纖維細胞生長因子，向多種細胞生長因子中以1000:1的容積比例加入濃度為10?ug·ml^-1的強力霉素，通過0.22ｕｍ濾器過濾加入強力霉素的多種細胞生長因子，得到溶劑，即為自體細胞生長因子制劑。

本發明所述上述組成成分按濃度配比依次為：血管內皮細胞生長因子：轉化細胞生長因子：成纖維細胞生長因子為8:5:6。

本發明所述自體細胞生長因子制劑的制備方法，其特征在于具體步驟為:

一、針管的制備：在生物安全柜（由美國Thermo公司生產）中，采用無菌技術將2500國際單位的低分子量肝素鈉（由齊魯制藥廠生產）抽入50?ml到無菌針管（由威海醫用高分子材料有限公生產司）中，制備成肝素化的針管做靜脈血采集用，以防止血液凝固。

二、血液分離：皮膚消毒后，用肝素化的針管抽取患者大約50?ml的靜脈血，在生物安全柜中分裝進50?ml的離心管（由美國Fisher公司生產）中，使用冷凍離心機（由美國Thermo公司生產）在1048?r·min^-1?下離心25?min（離心半徑9?cm），時離心管內的血液分為3層，上層為淺黃色的血漿，中層為白色的富血小板血漿，下層為紅細胞；

三、低溫凍存：吸取不帶紅細胞的中、上層血漿，將中層血漿和上層血漿的混合血漿置于無菌離心管中，用3支15?ml的無菌離心管（由美國Fisher公司生產）平分約20?ml的血漿]，于-20?℃冰箱（所述冰箱采用美國Fisher公司生產）內短時間保存，8-12小時，然后將冰箱內的溫度調至-80?℃后恒溫下長時間保存，以通過溫差變化促進血小板裂解，保存時間為12-24小時后，從-80?℃冰箱內取出凍存的自體混合血漿；

四、快速解凍：將裝有凍存的自體混合血漿的離心管放在37?℃水浴鍋中快速解凍，時間不超過5?min；

五、反復凍存和融化：反復重復步驟三和步驟四兩次以上，以利于最大程度的提高血小板裂解率。

六、自體細胞生長因子的獲?。簩⑷诨蟮难b有混合血漿的離心管放置到離心機內再以3054?r·min^-1的速度離心6?min（離心半徑9?cm），可見離心管內的混合血漿分為兩層，上層液為多種細胞生長因子，下層液為血小板破碎后的碎片，所述多種細胞生長因子包括血管內皮細胞生長因子、轉化細胞生長因子和成纖維細胞生長因子，

七、自體細胞生長因子制劑：取多種細胞生長因子，向多種細胞生長因子中按照1000:1的容積比例加入濃度為10?ug·ml^-1的強力霉素（由美國APP?Pharm公司生產），以達到防止感染的作用，過濾加入強力霉素的自體多種細胞生長因子溶劑，即得到自體細胞生長因子制劑。

一種由自體細胞生長因子的制備方法制得的制劑的治療用途用于促進骨折部位的生長。

本發明所述治療用途特別是促進對脛腓骨骨不連的生長。

本發明中的細胞因子促進骨折愈合的機理分析：