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[發明專利]一種四倍體矮牽牛的誘變方法有效

專利信息
申請號: 201410387594.6 申請日: 2014-08-07
公開(公告)號: CN104160953A 公開(公告)日: 2014-11-26
發明(設計)人: 魏躍;嵇怡;樊開青;劉艷;張瑩;史紅林;陳嘯寅;顏志明;王全智;賈思振;董慧 申請(專利權)人: 江蘇農林職業技術學院
主分類號: A01H1/08 分類號: A01H1/08
代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204 代理人: 王云
地址: 212400 江蘇省鎮江市*** 國省代碼: 江蘇;32
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摘要:
搜索關鍵詞: 一種 四倍體 牽牛 誘變 方法
【權利要求書】:

1.一種四倍體矮牽牛的誘變方法其特征在于,該方法包括如下步驟:?

(1)將矮牽牛種子播種在穴盤中,當幼苗2片子葉完全展開時,用吸附液體效果較好的介質放在2片子葉中間,與生長點緊密接觸;

(2)將穴盤放置于光照培養箱中,每天早8點和下午3點進行變溫處理,處理方法為:用質量濃度為1%的二甲基亞砜配制的二甲戊樂靈6-60mg/L和質量濃度為0.1%-1%的秋水仙素混合后得到的藥液滴到附著在2片子葉之間的介質上,對子葉展開期的二倍體矮牽牛幼苗進行誘導處理,每天處理2次持續處理3天;

(3)將處理結束的幼苗繼續在光照培養箱中生長5天后,移入溫室大棚中;

(4)當誘變植株生長發育進入成株后,初步進行農藝性狀、解剖學鑒定,在此基礎上進行細胞學鑒定,選擇染色體數目2n=28的植株確定為四倍體植株。

2.根據權利要求1所述的四倍體矮牽牛的誘變方法,其特征在于,步驟(2)中,光照培養箱中,光照強度設定為?4000lx。

3.根據權利要求1所述的四倍體矮牽牛的誘變方法,其特征在于,步驟(2)中,所述變溫處理的方法為:每次處理前3小時光照培養箱溫度設定為15℃,處理后溫度設定為30℃。

4.根據權利要求1所述的四倍體矮牽牛的誘變方法,其特征在于,步驟(2)中,所述藥液的配制方法為:先配制質量濃度為1%二甲基亞砜溶液,再根據計算結果往里面添加二甲戊樂靈和秋水仙素,其中二甲戊樂靈是質量濃度為33%的乳油。

5.根據權利要求1所述的四倍體矮牽牛的誘變方法,其特征在于,步驟(4)中觀測的農藝性狀有:葉片長度與寬度、葉片厚度、莖粗、株高、萼片長度與寬度、柱頭和花藥大小。

6.根據權利要求1所述的四倍體矮牽牛的誘變方法,其特征在于,步驟(4)中解剖學觀察性狀有葉背氣孔和花粉細胞的大小,觀察氣孔方法為:用尖頭鑷子將葉片背面表皮撕下,放置于載玻片上,滴一滴清水在40倍顯微鏡下用具有顯微測微標尺的目鏡測量氣孔長與寬;觀察花粉細胞方法為:從開放花朵中取少量成熟花粉,放置于載玻片上,滴一滴質量濃度為1%醋酸洋紅染色,5分鐘后在40倍顯微鏡下用具有顯微測微標尺的目鏡測量花粉細胞大小。

7.根據權利要求1所述的四倍體矮牽牛的誘變方法,其特征在于,步驟(4)中細胞學鑒定方法為:于晴天早晨8:00-10:00取長度4~7mm的幼蕾,先置于0.002mol.L-1?8-羥基喹啉水溶液中預處理3小時,蒸餾水沖洗3次后轉入卡諾氏固定液固定24小時,蒸餾水沖洗3次在1?mol.L-1HCl溶液60℃水浴解離5分鐘,蒸餾水沖洗3次用濾紙吸干水,放入45%(體積百分濃度)醋酸溶液配制的1%(質量濃度)洋紅染色液染色10小時;用鑷子將幼蕾移入干凈的載玻片上,用刀片切取雌蕊柱頭部位,滴1-2滴1%洋紅染色液,蓋上蓋玻片,用濾紙吸去多余洋紅染色液;蓋玻片上覆蓋4-5層濾紙,用鉛筆一端垂直敲打10余下,使材料盡量分散壓平,最后用大拇指垂直按壓,制片在酒精燈烘烤1-2秒;先在低倍鏡下尋找有絲分裂中期分裂相視野,然后在10×100倍油鏡下進行染色體計數。

8.根據權利要求7所述的四倍體矮牽牛的誘變方法,其特征在于,所述卡諾氏固定液是由無水乙醇和冰醋酸按體積比3:1制成的。

9.根據權利要求7所述的四倍體矮牽牛的誘變方法,其特征在于,所述體積百分濃度45%醋酸溶液配制的1%(質量濃度)洋紅染色液配制方法為:先加入45ml乙酸再加水55ml,混勻后將洋紅粉末1克緩慢倒入100ml?45%醋酸溶液中,邊煮邊攪拌,煮沸冷卻后過濾即可使用。

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