技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種檢測水中大腸埃希氏菌的方法和試劑盒。

背景技術

總大腸菌群(Total?Coliform)、耐熱大腸菌群(Thermotolerant?Coliform)和大腸埃希氏菌(Escherichia?coli)是指示水體中糞便污染的最重要的3個細菌學指標。這些菌屬可以在人、畜糞便中檢出，也可以在營養豐富的水體中檢出，即在非糞便污染的情況下，也有檢出這些細菌的可能性。耐熱大腸菌群組成與總大腸菌群組成相同，但主要組成是埃希氏菌屬，在此菌屬中與人類生活密切相關的僅有1個種，即大腸埃希氏菌，而其他如檸檬酸菌屬、克雷伯菌屬和腸桿菌屬所占數量較少。作為糞便污染的指示菌，大腸埃希氏菌檢出的意義最大，其次是耐熱大腸菌群，總大腸菌群的檢出意義略差一些。

目前，世界各國及國際組織都將大腸菌群數作為重要環境衛生學指標，并對其提出了嚴格的限制。世界衛生組織《飲用水水質標準》(第二版)中規定，所有用于飲用的水中大腸埃希氏菌或耐熱大腸菌在任意100mL水樣中不得檢出；現行美國飲用水水質標準國家一級飲用水標準規定總大腸菌群為0CFU/ml；中華人民共和國國家標準《生活飲用水水質衛生規范》規定，總大腸菌群、耐熱大腸菌群及大腸埃希氏菌每100mL水樣中不得檢出。

檢測大腸埃希氏菌等的傳統方法包括多管發酵法和濾膜法。多管發酵法適用于各種樣品，但操作復雜，檢測時間較長，濾膜法主要用于檢測雜質較少的水樣，操作比多管發酵法更為簡單，但是不適合檢測高濁度和其他復雜水樣。這兩種方法都具有檢測周期長，程序繁瑣的缺點，難以適應污染源快速診斷的需要。目前，國內外研究人員已經發展了一些新方法進行大腸埃希氏菌等的快速檢測，主要包括酶底物法、聚合酶鏈反應技術(PCR)、免疫分析法、生物傳感器法等。

其中酶底物法是已經納入國標的標準檢測方法，聚合酶鏈反應技術(PCR)、免疫分析法、生物傳感器法等方法還不成熟。

與傳統方法相比，國標酶底物法雖然將檢測時間縮短至24h，但是仍然不能滿足快速檢測的需要。以酶底物法為原理開發出來的在線實時監測儀器價格昂貴，而且基本上都是以進口產品為主。

中國專利200910148688.7公開了快速連續檢測糞大腸菌群及大腸菌群的方法，該方法以酶底物法為檢測原理，首先選擇培養液顯色底物，連續測定不同稀釋度糞大腸菌群或大腸菌群的生長曲線，通過生長曲線設定顯色底物特征值，然后測定不同稀釋度糞大腸菌群或大腸菌群顯色達到特征值所需時間，并建立初始濃度與達到特征值所需時間之間的線性關系，根據此曲線確定未知樣品的菌濃度。但是，該方法檢測對象是大腸菌群，其檢測方法并不適合用來檢測大腸埃希氏菌，同時最為關鍵的顯色培養基并未公開，而這些都是影響檢測準確度和檢測時間的重要因素。此外，現有以酶底物法為原理的檢測方法都存在取樣量過少的問題，一般只能取到55.5-100mL，而取樣量多少可以影響檢測結果的不確定性。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種檢測水中大腸埃希氏菌的方法，使得該方法能夠快速檢測出水中大腸埃希氏菌；

本發明的另一個目的在于提供一種檢測水中大腸埃希氏菌的方法，使得該方法能夠增加待檢測樣本取樣量；

本發明的另一個目的在于提供一種檢測水中大腸埃希氏菌的檢測培養液，使其能夠促使大腸埃希氏菌快速繁殖，縮短檢測時間。

為了實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種檢測水中大腸埃希氏菌的方法，包括如下步驟：

步驟1、提供一系列不同濃度的大腸埃希氏菌菌懸液，濃縮，分別加入到檢測培養液中培養，然后記錄各濃度下的大腸埃希氏菌菌懸液的特征時間，所述特征時間為各濃度下的大腸埃希氏菌菌懸液在365nm激發光下產生450nm熒光的熒光強度達到240時的時間，建立大腸埃希氏菌菌懸液濃度和特征時間的線性方程；

步驟2、將待測水樣濃縮，加入步驟1所述檢測培養液培養，在其410nm吸光度有明顯變化的前提下，記錄待測水樣特征時間，將其代入到步驟1中的線性方程中獲得待測水樣中大腸埃希氏菌的濃度；

其中，所述檢測培養液包括Tryptone、硫酸鎂、硫酸錳、硫酸鋅、硫酸銨、氯化鈉、氯化鈣、亞硫酸鈉、吐溫-80、NaH₂PO₄·H₂O、K₂HPO₄·3H₂O、鄰硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷、4-甲基傘形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷、3號膽鹽。