技術領域

本發明屬于生物工程領域，具體涉及一種傳染性法氏囊病毒、滅活疫苗及其制備方法。

背景研究

傳染性法氏囊病毒(Infectious?bursal?disease?Virus，縮寫為IBDV)隸屬于雙RNA病毒科雙RNA病毒屬，此病主要損害雞體淋巴器官造成免疫抑制，從而導致多種疫苗免疫無效及對其它疾病如新城疫、球蟲病等的易感性增高而引起經濟損失。傳染性法氏囊病(Infectious?bursal?disease，IBD)于1957年首次發生于美國Delware州南部Gumboro地區，我國于1979年相繼在廣州、北京、上海發現本病，對實際養殖生產造成重大損失，IBDV疫苗研究隨即展開，至今國內外已開發出弱毒、中等毒力活疫苗、滅活疫苗和基因工程疫苗，對該病防控起到一定作用。但是近年來，我國一些地方，特別是在法氏囊母源抗體高低不齊的蛋雞和肉雞飼養區，仍然屢有傳染性法氏囊病(IBDV)的發生和流行，其原因主要為：一是超強毒株出現。IBDV在野外環境中變異能力很強，每年均有超強毒力的IBDV野毒出現，這一類毒株的毒力極有可能突破現有疫苗的保護，從而導致免疫雞群出現感染發病、死亡的現象。二是弱毒疫苗無法突破母源抗體。現行免疫程序中IBDV弱毒苗一般在14～18日齡免疫，接種后進入雞體內的活病毒會被母源抗體捕獲、中和而失去復制活性，因而不能達到保護效果。同時雛雞體內母源抗體由高逐漸消減，雖有一定保護力但開始有部分雞暴露在感染威脅當中。三是傳染性法氏囊滅活疫苗研究落后。目前市場上使用的滅活疫苗一類是法氏囊全病毒滅活疫苗，使用傳染性法氏囊病毒株適應細胞制備，另一類是基因工程疫苗，采用大腸桿菌表達傳染性法氏囊病毒VP2基因制備。這兩種疫苗可以產生一定的免疫保護效果，但是，對于出現基因變異的超強毒株，會出現保護性下降的情況。因此，針對目前我國雞傳染性法氏囊病發病趨勢，分離法氏囊超強毒流行毒株，篩選其中免疫原性好、且可以適應細胞繁殖的種毒制備疫苗，對于該病的預防具有極其重要的意義，是符合生產實際需求的重要產品。

發明內容

本發明的目的在于提供傳染性法氏囊病毒NJ09株，該毒株是超強的流行毒株、免疫原性強且適應細胞規模化培養。

本發明的另一目的是提供所述傳染性法氏囊病毒NJ09株在制備傳染性法氏囊病毒疫苗中的應用。

本發明的再一目的是提供一種傳染性法氏囊滅活疫苗，該疫苗接種后，抗體效價高、持續期長，對傳染性法氏囊病毒標準強毒株及超強流行毒株攻毒保護率達到90％～100％，同時安全性高、效力穩定，注射后預防效果顯著，能很好地控制傳染性法氏囊疾病的發生與流行。

本發明的再一目的是提供所述傳染性法氏囊滅活疫苗的制備方法，該方法簡單、安全、成本低。

本發明的目的采用如下技術方案實現。

一種傳染性法氏囊病毒NJ09株，其保藏登記號為：CGMCC?NO：7758。預防傳染性法氏囊的滅活疫苗，所用毒株為本單位2009年分離、鑒定的傳染性法氏囊病毒新毒株(NJ09株)，研制出傳染性法氏囊滅活疫苗(NJ09株)。

本發明還提供所述傳染性法氏囊病毒NJ09株在制備傳染性法氏囊病毒疫苗中的應用。

本發明還提供制備傳染性法氏囊病毒NJ09株毒液的方法，包括如下步驟：將傳染性法氏囊病毒NJ09株接種Vero細胞或DF-1細胞進行培養，得到所述毒液。

本發明還提供所述方法制備的傳染性法氏囊病毒NJ09株毒液。

另外，本發明還提供傳染性法氏囊病毒疫苗，活性成分為滅活的所述傳染性法氏囊病毒NJ09株。

在本發明中，所述疫苗的制備方法包括如下步驟：將權利要求4所述傳染性法氏囊病毒NJ09株毒液依次滅活、乳化，得到所述疫苗。

在本發明中，所述傳染性法氏囊病毒NJ09株毒液采用甲醛進行滅活。

在本發明中，所述乳化步驟具體為：將滅活后的傳染性法氏囊病毒NJ09株毒液與吐溫-80混合均勻，得到水相溶液；將注射用白油和司本－80混合混勻，得到油相溶液；將水相和油相乳化，得到所述疫苗。

有益效果：

(1)傳染性法氏囊病毒NJ09株，是超強的流行毒株、免疫原性強、攻毒保護性好且適應細胞規模化培養。