[發明專利]一種提高大腸桿菌發酵生產番茄紅素產量的方法有效
| 申請號： | 201410311356.7 | 申請日： | 2014-07-02 |
| 公開（公告）號： | CN104073459B | 公開（公告）日： | 2017-05-24 |
| 發明（設計）人： | 黃磊;濮悅;徐志南;蔡謹 | 申請（專利權）人： | 浙江大學 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 杭州求是專利事務所有限公司33200 | 代理人： | 邱啟旺 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 提高 大腸桿菌 發酵 生產 番茄 產量 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種提高大腸桿菌發酵生產番茄紅素產量的方法，其特征在于，包括以下步驟：
（1）制備產番茄紅素的大腸桿菌菌株：crtE、crtB、crtI是合成番茄紅素所需的酶，將這三種酶的基因通過同源重組轉入大腸桿菌BW25113，得到產番茄紅素的大腸桿菌菌株BW25113-BIE；
（2）將大腸桿菌菌株中的野生型crp基因克隆到pKSC質粒上，得到重組載體pKSC-crp；野生型crp的基因序列如SEQ ID NO.1所示，野生型crp的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，pKSC質粒的基因序列如SEQ ID NO.3所示，重組載體pKSC-crp的基因序列如SEQ ID NO.4所示；
（3）堿基替換：將步驟2得到的重組載體pKSC-crp上的crp基因進行堿基替換：A26T，得到優化的重組載體pKSC-crp1；crp1的基因序列如SEQ ID NO.5所示，crp1 的氨基酸序列如SEQ ID NO.6 所示，pKSC-crp1的基因序列如SEQ ID NO.11所示；
（4）用pKSC-crp1中的crp1基因替換步驟1得到的產番茄紅素的大腸桿菌菌株BW25113-BIE中的野生型crp基因，得到番茄紅素高產量的菌株BW25113-BIE crp::crp1。
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