1.一種高溫脅迫下褐飛虱內參基因的篩選方法，其特征在于：以25℃飼養的褐飛虱為對照，設置6個高溫梯度對褐飛虱成蟲進行脅迫處理，處理后立即提取總RNA，反轉錄合成cDNA，然后以對照和各處理為材料進行實時熒光定量PCR驗證，采用geNorm和BestKeeper軟件進行數據分析，從而篩選出褐飛虱成蟲體內不同高溫脅迫和非脅迫下最穩定表達的內參基因。

2.根據權利要求1所述的高溫脅迫下褐飛虱內參基因的篩選方法，其特征在于包括以下步驟：

<1>采用primer5.0軟件設計合成褐飛虱actin1、actin2、actin3、18S、28S和α-2-Tublin候選內參基因及熱激蛋白hsp90基因特異性實時熒光定量PCR引物，并利用定量PCR溶解曲線法確定其擴增特異性及按10倍梯度稀釋cDNA分別進行定量PCR建立標準曲線，確立每對引物的擴增效率；

<2>分別選取30℃、32℃、34℃、36℃、38℃和40℃高溫脅迫1小時和2小時及非脅迫處理的褐飛虱雌、雄成蟲為實驗材料，提取總RNA，分別反轉錄合成cDNA進行實時熒光定量PCR分析；

<3>將實時熒光定量PCR實驗數據輸入到geNorm和BestKeeper軟件進行內參基因穩定性分析。

3.根據權利要求2所述的高溫脅迫下褐飛虱內參基因的篩選方法，其特征在于步驟<1>和<2>中褐飛虱成蟲為羽化后3-7天的雌、雄成蟲。

4.根據權利要求2所述的高溫脅迫下褐飛虱內參基因的篩選方法，其特征在于步驟<2>中褐飛虱的飼養條件和脅迫處理方法分別為：

飼養條件：從野外采集活體褐飛虱，在實驗室25℃恒溫，濕度75±5％，光照:黑暗＝14小時:10小時條件下用新鮮水稻飼養；2-3代后，采用成蟲進行高溫脅迫處理；

脅迫處理方法：設置溫照培養箱溫度到處理溫度，分別把褐飛虱雌、雄成蟲引入至放置新鮮水稻苗的玻璃管中，紗布封口后分別處理1小時和2小時；處理后室溫恢復1小時，立即提取總RNA，保存于液氮中或-80℃備用；每個處理均設置3個生物學重復。

5.根據權利要求2所述的高溫脅迫下褐飛虱內參基因的篩選方法，其特征在于步驟<2>中實時熒光定量PCR的條件和程序分別為：

實時熒光定量PCR的條件:PCR所用的cDNA模板是用1μg樣品總RNA反轉錄合成而來，定量PCR反應體積為20μL，包含Premix?Ex?Taq?II(Tli?RNaseH?Plus)(2×)10μL，F/R引物各0.25μM，模板2μL，添加滅菌蒸餾水至20μL；

實時熒光定量PCR的程序:95℃30S，接下來95℃10S，60℃30S共40個循環，循環結束后繪制溶解曲線：55℃-95℃，每0.5℃收集一次熒光信號；每個樣本均設置3個定量PCR重復。

6.根據權利要求5所述的高溫脅迫下褐飛虱內參基因的篩選方法，其特征在于所述候選內參基因和熱激蛋白hsp90基因的引物分別具有以下堿基序列：

actin1：TGTCTCTCACACAGTCCCCATCT/GTCAAGTCACGACCAGCCAAG；

actin2：AGTCGCACCCGAAGAG/AGCCTGGATAGCAACATA；

actin3：TGTGATGGTGGGTATGGG/ATGGCAGGTGAAGCGAAG；

18S：ACCAGGTCCAGACACAATG/CACTCCACCAACTAAGAACG；

28S：ATCAGCGGGGAAAGAAGA/ATCCGAGTAAGTAAGGAAACGA

α-2-Tublin：GGGCTTCCTCATCTTCC/AACGGCTGTTGATACCTG；

hsp90:TGTGAACAACCTGGGAAC/GGACCGTAAACGAACCTC。

7.權利要求1所述篩選方法在利用熒光定量PCR技術研究熱脅迫相關基因的表達與功能方面的應用。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于：以高溫脅迫后的褐飛虱為樣本，以褐飛虱熱激蛋白基因hsp90為目的基因，篩選出的基因為內參基因探討hsp90在褐飛虱熱脅迫下的表達規律。