技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物學(xué)免疫方法的檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)致病菌的試劑盒方法及其應(yīng)用。

技術(shù)背景

致病菌（Pathogenic?bacteria)是指能引起疾病的微生物。致病菌包括細(xì)菌、病毒、螺旋體、立克次氏體、衣原體、支原體、真菌及放線菌等。一般所說的致病菌指的是病原微生物中的細(xì)菌。細(xì)菌的致病性與其毒力、侵入數(shù)量及侵入門戶有關(guān)。雖然絕大多數(shù)細(xì)菌是無害甚至有益的，但是相當(dāng)大一部分可以致病。條件致病菌只在特定條件下致病，如有傷口可以允許細(xì)菌進(jìn)入血液，或者免疫力降低時(shí)。

例如：空腸彎曲菌是多種動(dòng)物如牛、羊、狗及禽類的正常寄居菌。在它們的生殖道或腸道有大量細(xì)菌，故可通過分娩或排泄物污染食物和飲水?？漳c彎曲菌是一種人畜共患病病原茵，可以引起人和動(dòng)物發(fā)生多種疾病，并且是一種食物源性病原茵，被認(rèn)為是引起全世界人類細(xì)菌性腹瀉的主要原因。主要癥狀為腹瀉和腹痛，有時(shí)發(fā)熱，偶有嘔吐和脫水。人群普遍易感，5歲以下兒童的發(fā)病率最高，夏秋季多見?？漳c彎曲菌有內(nèi)毒素能侵襲小腸和大腸粘膜引起急性腸炎，亦可引起腹瀉的暴發(fā)流行或集體食物中毒。潛伏期一般為3～5天，對(duì)人的致病部位是空腸、回腸及結(jié)腸。大腸埃希氏菌(E.?coli)通常稱為大腸桿菌，是Escherich在1885年發(fā)現(xiàn)的，分布在自然界。雖然絕大多數(shù)大腸桿菌與人類有著良好合作，但是仍有少部分特殊類型的大腸桿菌具有相當(dāng)強(qiáng)的毒力，一旦感染，將造成嚴(yán)重疫情。其中最具代表性的就是代號(hào)為O157:H7的大腸桿菌，它是EHEC（腸出血性大腸桿菌）家族中的一員。人體感染EHEC后，會(huì)發(fā)生嚴(yán)重的痙攣性腹痛和反復(fù)發(fā)作的出血性腹瀉，同時(shí)伴有發(fā)熱、嘔吐等表現(xiàn)，多為EHEC產(chǎn)生的毒素所致。某些嚴(yán)重感染者毒素隨血行播散造成溶血性貧血，紅細(xì)胞、血小板減少；腎臟受到波及時(shí)還會(huì)發(fā)生急性腎功能衰竭甚至死亡。

目前檢測(cè)致病菌的常見方法有：平板培養(yǎng)法、儀器法、免疫層析試紙條法等。但這些方法操作復(fù)雜，對(duì)檢測(cè)環(huán)境或儀器要求高，耗時(shí)較長(zhǎng)，如平板法費(fèi)時(shí)且環(huán)境要求嚴(yán)格，儀器法既昂貴又繁瑣。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的在于提供一種檢測(cè)致病菌的試劑盒，能夠簡(jiǎn)單、快速、靈敏、原位檢測(cè)致病菌。

本發(fā)明的另一目的是提供上述試劑盒在檢測(cè)致病菌方面的應(yīng)用。

本發(fā)明的再一目的是提供采用上述試劑盒檢測(cè)致病菌的方法，該方法簡(jiǎn)單、快速、靈敏、特異性強(qiáng)，且能夠?qū)崿F(xiàn)原位檢測(cè)。

本發(fā)明的目的采用如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)。

一種檢測(cè)致病菌的試劑盒，包括下列試劑：金納米粒子、抗致病菌抗體、阿樸色氨酸酶、抗致病菌抗體標(biāo)記的納米磁珠。

在本發(fā)明中，所述試劑盒還包括牛血清白蛋白溶液和反應(yīng)物溶液，所述反應(yīng)物溶液含有L-色氨酸和磷酸吡哆醛。

在本發(fā)明中，所述致病菌為大腸桿菌或空腸彎曲菌。

在本發(fā)明中，所述抗體為單克隆抗體。

本發(fā)明還提供上述試劑盒在檢測(cè)致病菌方面的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供采用上述試劑盒檢測(cè)致病菌的方法，包括如下步驟：

（1）金納米粒子的表面同時(shí)吸附阿樸色氨酸酶和抗致病菌抗體，得到酶抗體復(fù)合物；

（2）抗致病菌抗體標(biāo)記的納米磁珠與待測(cè)樣品混合，離心，取沉淀；

（3）將步驟（2）所述沉淀加入步驟（1）所述酶抗體復(fù)合物中，磁性分離納米磁珠；

（4）將步驟（3）所述納米磁珠加入到所述反應(yīng)物溶液中進(jìn)行反應(yīng)；

（5）通過檢測(cè)步驟（4）反應(yīng)后混合物中的吲哚，對(duì)致病菌進(jìn)行定性或定量檢測(cè)。

在本發(fā)明中，所述致病菌為大腸桿菌或空腸彎曲菌。

本發(fā)明中致病菌指的是病原微生物中的細(xì)菌。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果如下：

1、本發(fā)明試劑盒包括金納米粒子、抗致病菌抗體、阿樸色氨酸酶、抗致病菌抗體標(biāo)記的納米磁珠。采用本發(fā)明試劑盒檢測(cè)致病菌的原理：如果待測(cè)樣品中含有目標(biāo)致病菌，那么金納米粒子、抗致病菌抗體、阿樸色氨酸酶復(fù)合物能夠與目標(biāo)致病菌、抗致病菌抗體標(biāo)記的納米磁珠形成雙抗夾心結(jié)構(gòu)的復(fù)合物，磁性分離納米磁珠，獲得雙抗夾心結(jié)構(gòu)的復(fù)合物，通過阿樸色氨酸酶催化L-色氨酸反應(yīng)產(chǎn)生有氣味的吲哚，對(duì)目標(biāo)致病菌進(jìn)行定性或定量檢測(cè)。由于本發(fā)明檢測(cè)方法，使用了可特性識(shí)別致病菌的抗體，因而具有特異性高、穩(wěn)定性好的特點(diǎn)。另外，本發(fā)明方法還具有簡(jiǎn)單、快速、靈敏、能原位檢測(cè)致病菌的優(yōu)點(diǎn)。

2、本發(fā)明為通用型方法，只需要替換特異性識(shí)別致病菌的單克隆抗體，即可實(shí)現(xiàn)對(duì)任意致病菌的快速、現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，應(yīng)用范圍廣，簡(jiǎn)單易于推廣應(yīng)用。

附圖說明