[發明專利]一種活動精子DNA的拉曼光譜的快速測量方法有效
| 申請號: | 201410185856.0 | 申請日: | 2014-05-05 |
| 公開(公告)號: | CN103940802A | 公開(公告)日: | 2014-07-23 |
| 發明(設計)人: | 黃祖芳;陳榮;陳冠楠;林居強;馮尚源;陳希文 | 申請(專利權)人: | 福建師范大學 |
| 主分類號: | G01N21/65 | 分類號: | G01N21/65 |
| 代理公司: | 福州君誠知識產權代理有限公司 35211 | 代理人: | 戴雨君 |
| 地址: | 350108 福建省福*** | 國省代碼: | 福建;35 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 活動 精子 dna 光譜 快速 測量方法 | ||
1.一種活動精子DNA的拉曼光譜的快速測量方法,其特征是:
(1)精液液化
無菌試管收集精液樣品,室溫環境下靜置20分鐘使精液自然液化;
(2)精液中活動精子的分離與準備
利用移液槍吸取已液化精液,加入到含有密度梯度離心液的離心管中,1000g離心10分鐘,吸棄上層精漿,保留離心管底部的精子。而后再加入PBS緩沖液重懸,再次離心洗滌,吸棄上清,然后加入PBS緩沖液重懸制成精子懸液,置于孵育箱中孵育;
(3)活動精子的“固定”處理
首先將尺寸為2×4cm的金屬底板粘貼在培養皿上,往培養皿內加入PBS緩沖液,利用頭部細長的玻璃毛細管吸取少量孵育后的精子懸液,然后將玻璃毛細管垂直浸入裝有PBS緩沖液的培養皿中,玻璃毛細管細長的頭部距離金屬底板2~3mm,靜置3分鐘,精子將以頭部往下的方式游出,并接觸金屬底板,形成頭部“固定”尾部劇烈搖擺的吸附狀態;
(4)精子頭部拉曼光譜的測量
設置600~1800cm-1的光譜測量范圍,利用顯微鏡普通觀察模式下,將吸附于金屬底板上的精子頭部移動到視野中心,設置積分時間為30秒,選擇785nm的激發光波長,獲得精子頭部拉曼光譜數據。
2.?根據權利要求1所述的一種活動精子DNA的拉曼光譜的快速測量方法,其特征是步驟(2)中液化精液:密度梯度離心液:PBS緩沖液=?2ml:1.5ml:5ml。
3.根據權利要求1所述的一種活動精子DNA的拉曼光譜的快速測量方法,其特征是步驟(2)中所述的孵育是在37℃的孵育箱中孵育30分鐘。
4.?根據權利要求1所述的一種活動精子DNA的拉曼光譜的快速測量方法,其特征是所述的金屬底板是指鋁合金金屬底板或不銹鋼金屬底板。
5.根據權利要求1所述的一種活動精子DNA的拉曼光譜的快速測量方法,其特征是步驟(3)中所述的玻璃毛細管細長的頭部距離金屬底板2~3mm,靜置3分鐘。
6.根據權利要求1所述的一種活動精子DNA的拉曼光譜的快速測量方法,其特征是步驟(4)中所述的600~1800cm-1的光譜測量范圍,積分時間為30秒,激發光波長785nm。
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