技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種分析預(yù)測(cè)平臺(tái)的建立方法，尤其是一種基于代謝組學(xué)數(shù)據(jù)建立分析預(yù)測(cè)糖尿病認(rèn)知功能障礙平臺(tái)的方法。

背景技術(shù)

糖尿病認(rèn)知功能障礙作為糖尿病的常見并發(fā)癥，主要癥狀以學(xué)習(xí)能力下降、記憶損害為主，嚴(yán)重可發(fā)展為癡呆。雖然并不是糖尿病中最嚴(yán)重的并發(fā)癥，但由此病引起的后果是非常嚴(yán)重的，譬如糖尿病患者忘記吃藥，將會(huì)加重病情等。糖尿病患者患上認(rèn)知功能障礙的幾率比正常人高50%，Ⅱ型糖尿病中年患者患癡呆的長(zhǎng)期風(fēng)險(xiǎn)顯著提高；65歲以上的老年人12~25%都患有糖尿病，世界范圍內(nèi)10到15個(gè)癡呆患者就有1個(gè)是由Ⅱ型糖尿病引起，如果把糖尿病前期也納入考慮，大約可達(dá)到7~10個(gè)患者中就有1個(gè)。目前，臨床上采用MoCA和MMSE方法來(lái)評(píng)價(jià)糖尿病認(rèn)知功能障礙，缺乏血液學(xué)證據(jù)。

高效液相色譜作為一種分離設(shè)備的聯(lián)用技術(shù)被廣泛的使用，其中以高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用最為常見。高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)始于20?世紀(jì)70?年代，其分析的物質(zhì)多數(shù)直接進(jìn)樣在HPLC?上得到分離，然后在MS?上獲得準(zhǔn)確的定性和定量，從而大大地縮短了分析時(shí)間，提高了分析的靈敏度和準(zhǔn)確性。

但是，迄今為止還沒(méi)有關(guān)于以高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析血漿內(nèi)源性成分并獲得代謝組學(xué)數(shù)據(jù)，從而建立分析預(yù)測(cè)糖尿病認(rèn)知功能障礙平臺(tái)的方法的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在的上述技術(shù)問(wèn)題，提供一種基于代謝組學(xué)數(shù)據(jù)建立分析預(yù)測(cè)糖尿病認(rèn)知功能障礙平臺(tái)的方法。

本發(fā)明的技術(shù)解決方案是：一種基于代謝組學(xué)數(shù)據(jù)建立分析預(yù)測(cè)糖尿病認(rèn)知功能障礙平臺(tái)的方法，其特征在于按照如下步驟進(jìn)行：

a.??取冷凍儲(chǔ)存的三組血漿樣本，分別為A組健康人；B組糖尿病患者但未

患認(rèn)知功能障礙；C組糖尿病患者但患有認(rèn)知功能障礙；將三組血漿樣本均置于室溫下解凍15min，渦漩震蕩5s；分別取每個(gè)樣本100μl加入300μl?HPLC級(jí)甲醇，渦漩震蕩30s，4°C靜置20min；對(duì)所有樣本進(jìn)行冷凍離心，12000rpm,?4°C，15min，取每個(gè)樣本的上清液；

b．將每個(gè)樣本的上清液分別進(jìn)入LC/MS進(jìn)行分離；

色譜條件：分離色譜柱為C18色譜柱，分離條件為：柱溫為40℃；流速0.4?ml/min；流動(dòng)相組成A：水+0.1%甲酸，B：乙腈+0.1%甲酸；梯度洗脫程序見表1；進(jìn)樣量為5μl，自動(dòng)進(jìn)樣器溫度4℃；

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