技術領域：

本發明屬于生物化學與分子生物學領域，具體涉及一種血清淀粉樣蛋白A及其編碼基因和應用。

背景技術：

作為世界上最大的貝類養殖國，我國的貝類養殖已經成為沿海海水養殖業的支柱之一。我國貝類年產量占世界貝類總產量的60%以上。據2012年商務部統計，2011年，我國海洋貝類養殖產量為1179.6萬噸，其中牡蠣375.63萬噸，經濟價值達到200多億元人民幣，占海水貝類養殖產量的30％以上，因此，牡蠣的養殖在我國沿海經濟社會發展中占據舉足輕重的地位，并具有巨大的發展潛力。但是，我國海洋貝類的發展是以傳統養殖育種為主，以面積、能耗為代價的，產量因各種條件變化而波動，而且，由于缺乏有效的疾病檢測手段，隨著養殖規模的擴大，對于牡蠣養殖的風險也越來越大。以太平洋牡蠣為例，大規模死亡事件頻繁發生，甚至一些養殖的二齡牡蠣死亡率也達到40%-50%，有的高達70%-80%，有的養殖場的牡蠣幾乎全部死光。引起牡蠣死亡的原因很多，其中致病菌及寄生蟲的侵害加重了牡蠣的大量死亡，特別是在水交換差、水質欠佳的高溫季節更易使牡蠣患病死亡。因此，建立實時的牡蠣養殖病害的預防防治機制，是人們所亟待解決的問題之一。

血清淀粉樣蛋白A(serum?amyloid?A，SAA)屬于載脂蛋白家族成員，是目前應用最為廣泛的病理檢測的金標準。在人類等脊椎動物中，SAA已經被開發成型的試劑盒，廣泛的應用于甄別宿主的健康與否。環境脅迫、創傷以及病原菌感染均能引起SAA的急性顯著性應答，這些因素使該蛋白具有廣闊的應用前景。而且，該蛋白正常情況下表達水平不高，而病理情況下的表達高達正常水平的數百倍至數千倍，從而提高了儀器檢驗的靈敏度，檢測手段的可操作性大大提高。

發明內容：

本發明的第一個目的是提供一個牡蠣的病理檢測的標志性基因，即血清淀粉樣蛋白A(serum?amyloid?A，SAA)基因。

本發明的血清淀粉樣蛋白A基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1的第148位-567位堿基所示。

本發明的第二個目的是提供血清淀粉樣蛋白A，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

本發明的第三個目的是提供血清淀粉樣蛋白A基因作為牡蠣健康狀況的標志性基因在制備牡蠣的病理檢測試劑中的應用。

本發明在香港巨牡蠣轉錄組測序的基礎上，發現了一個牡蠣的病理檢測的標志性基因，即血清淀粉樣蛋白A(serum?amyloid?A，SAA)基因。通過RACE技術，我們獲得了該基因的全長，該基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1的148bp-567bp所示，其編碼的血清淀粉樣蛋白A的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。該基因的核酸序列具有高度的物種特異性，其核酸序列約有40-60%同源于已知其他物種的SAA基因，該基因在軟體動物中屬于首次發現，目前該基因除了在脊椎動物中有發現之外，在無脊椎動物中則只有在棘皮動物有所發現。定量PCR實驗表明，牡蠣SAA在細菌感染后顯著上調，與哺乳動物極為相似，因此，該基因也可以作為檢測牡蠣健康狀況的金標準。通過檢測該基因可以隨時監測牡蠣的健康狀況，對于牡蠣疾病的預防提供一個積極而準確的警戒信號，防止了災害的擴大。該技術的應用，將進一步提升養殖貝類的種質創新能力，支撐產業的高效可持續性發展。

附圖說明：

圖1.實時定量PCR檢測SAA?mRNA在不同組織中的分布。實驗結果表明SAA在性腺、外套膜與觸唇中有顯著性表達，在鰓、心臟、閉殼肌和消化腺中有中度表達，在血細胞幾乎無表達。

圖2.病原菌刺激誘導SAA的表達。溶藻弧菌（A）、葡萄球菌圖（B）與酵母菌圖（C）等病原菌分別刺激后，血細胞中SAA的表達顯著上調。星號（**）指示和對照組差異極其顯著。

具體實施方式：

以下實施例是對本發明的進一步說明，而不是對本發明的限制。

實施例1：

一、RNA提取及反轉錄

a).香港巨牡蠣細胞或組織加Trizol后，采用組織研磨器研磨，室溫放置5min，使其充分裂解。

b).12,000rpm離心5min，棄沉淀。

c).按200ul氯仿/ml?Trizol加入氯仿，振蕩混勻后室溫放置15min。

d).4℃12,000g離心15min。

e).吸取上層水相，至另一離心管中。

f).按0.5ml異丙醇/ml?Trizol加入異丙醇混勻，室溫放置5-10min。