[發(fā)明專(zhuān)利]K-ras基因8種突變熒光分型檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201310732595.5 | 申請(qǐng)日： | 2013-12-25 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN103695555A | 公開(kāi)（公告）日： | 2014-04-02 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 吳舒歌;吳大治;夏懿 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 上海星耀醫(yī)學(xué)科技發(fā)展有限公司;上海復(fù)星醫(yī)藥（集團(tuán)）股份有限公司 |
| 主分類(lèi)號(hào)： | C12Q1/68 | 分類(lèi)號(hào)： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 暫無(wú)信息 | 代理人： | 暫無(wú)信息 |
| 地址： | 201315 上海*** | 國(guó)省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | ras 基因 突變 熒光 檢測(cè) 試劑盒 方法 | ||
1.一種人類(lèi)K-ras基因8種突變熒光分型檢測(cè)試劑盒，該試劑盒包括PCR混合反應(yīng)液、等位基因特異性MGB探針、通用上游引物、ARMS下游引物、野生型內(nèi)標(biāo)探針及野生型下游引物，以及陽(yáng)性對(duì)照品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人類(lèi)K-ras基因8種突變熒光分型檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述PCR混合反應(yīng)液中含PCR?Buffer、UNG酶、Taq?DNA聚合酶、MgCl2、dNTPs。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人類(lèi)K-ras基因8種突變熒光分型檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述等位基因特異性MGB探針序列如SEQ?ID?NO:1、SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3、SEQ?ID?NO:4、SEQ?ID?NO:5、SEQ?ID?NO:6、SEQ?ID?NO:7、SEQ?ID?NO:8所示。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人類(lèi)K-ras基因8種突變熒光分型檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述通用上游引物序列如SEQ?ID?NO:9所示；?所述ARMS下游引物序列如SEQ?ID?NO:10、SEQ?ID?NO:11、SEQ?ID?NO:12、SEQ?ID?NO:13、SEQ?ID?NO:14、SEQ?ID?NO:15、SEQ?ID?NO:16、SEQ?ID?NO:17所示。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人類(lèi)K-ras基因8種突變熒光分型檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述野生型內(nèi)標(biāo)探針序列如SEQ?ID?NO:18所示；所述野生型下游引物序列如SEQ?ID?NO:19所示。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人類(lèi)K-ras基因8種突變熒光分型檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述等位基因特異性MGB探針包括如SEQ?ID?NO:1和SEQ?ID?NO:2所示的序列中的一種或多種時(shí)，所述陽(yáng)性對(duì)照品是存在密碼子12?GGT?>?GAT和12?GGT?>?AGT置換突變的混合質(zhì)粒DNA。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人類(lèi)K-ras基因8種突變熒光分型檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述等位基因特異性MGB探針包括如SEQ?ID?NO:3和SEQ?ID?NO:4所示的序列中的一種或多種時(shí)，所述陽(yáng)性對(duì)照品是存在密碼子12?GGT?>?GTT和12?GGT?>?GCT置換突變的混合質(zhì)粒DNA。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人類(lèi)K-ras基因8種突變熒光分型檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述等位基因特異性MGB探針包括如SEQ?ID?NO:5和SEQ?ID?NO:6所示的序列中的一種或多種時(shí)，所述陽(yáng)性對(duì)照品是存在密碼子12?GGT?>?TGT和12?GGT?>?CGT置換突變的混合質(zhì)粒DNA。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人類(lèi)K-ras基因8種突變熒光分型檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述等位基因特異性MGB探針包括如SEQ?ID?NO:7和SEQ?ID?NO:8所示的序列中的一種或多種時(shí)，所述陽(yáng)性對(duì)照品是存在密碼子13?GGC?>?GAC和13?GGC?>?CGC置換突變的混合質(zhì)粒DNA。
10.一種人類(lèi)K-ras基因8種突變熒光分型檢測(cè)方法，其特征在于：包括以下步驟：按常規(guī)方法提取待檢測(cè)樣本的基因組DNA，然后分4個(gè)反應(yīng)管（A、B、C、D）進(jìn)行檢測(cè)，首先在每個(gè)反應(yīng)管中分別加入PCR混合反應(yīng)液、通用上游引物、野生型內(nèi)標(biāo)探針及野生型下游引物，然后在反應(yīng)管A加入檢測(cè)密碼子12?GGT?>?GAT與12?GGT?>?AGT置換突變的MGB探針和ARMS下游引物；在反應(yīng)管B加入檢測(cè)密碼子12?GGT?>?GTT與12?GGT?>?GCT置換突變的MGB探針和ARMS下游引物；在反應(yīng)管C加入檢測(cè)密碼子12?GGT?>?TGT與12?GGT?>?CGT置換突變的MGB探針和ARMS下游引物；在反應(yīng)管D加入檢測(cè)密碼子13?GGC?>?GAC與13?GGC?>?CGC置換突變的MGB探針和ARMS下游引物，進(jìn)行核酸樣本的熒光定量PCR檢測(cè)；
????所述通用上游引物的序列如SEQ?ID?NO:9所示；
????所述野生型內(nèi)標(biāo)探針及野生型下游引物序列如SEQ?ID?NO:18、SEQ?ID?NO:19所示；
所述用于檢測(cè)密碼子12?GGT?>?GAT與12?GGT?>?AGT置換突變的MGB探針和ARMS下游引物序列如SEQ?ID?NO:1、SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:10、SEQ?ID?NO:11所示；
????所述用于檢測(cè)密碼子12?GGT?>?GTT與12?GGT?>?GCT置換突變的MGB探針和ARMS下游引物序列如SEQ?ID?NO:3、SEQ?ID?NO:4、SEQ?ID?NO:12、SEQ?ID?NO:13所示；
????所述用于檢測(cè)密碼子12?GGT?>?TGT與12?GGT?>?CGT置換突變的MGB探針和ARMS下游引物序列如SEQ?ID?NO:5、SEQ?ID?NO:6、SEQ?ID?NO:14、SEQ?ID?NO:15所示；
所述用于檢測(cè)密碼子13?GGC?>?GAC與13?GGC?>?CGC置換突變的MGB探針和ARMS下游引物序列如SEQ?ID?NO:7、SEQ?ID?NO:8、SEQ?ID?NO:16、SEQ?ID?NO:17所示。
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