技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于環(huán)境毒理學領(lǐng)域，涉及一種利用斑馬魚測試典型抗生素廢水毒性的方法。

背景技術(shù)

抗生素廢水是一類色度高、含難降解和生物毒性物質(zhì)多的高濃度有機廢水。2010年7月國家環(huán)保部頒布了《制藥工業(yè)水污染物排放標準》，其中規(guī)定了以抗生素等為主的發(fā)酵類制藥工業(yè)企業(yè)水污染物的排放限值、監(jiān)測和監(jiān)控要求。涉及毒性的排放指標只有急性毒性指標（HgCl₂毒性當量），測試方法為發(fā)光細菌法，該指標僅能反映抗生素廢水是否對發(fā)光菌有毒性，但發(fā)光菌為低等生物，其結(jié)果不能代表抗生素廢水對高等生物的影響，為此需要尋找新的方法和指標來評價抗生素廢水的生物毒性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為解決現(xiàn)在抗生素廢水生物毒性定性和定量評估的問題，提供了一種采用斑馬魚測試典型抗生素廢水毒性的方法。該方法采用急性毒性、亞急性毒性測試，定性和定量兩種指標描述典型抗生素廢水的生物毒性，彌補抗生素廢水生物毒性監(jiān)測指標的不足。

本發(fā)明的思路是，采用短期（96小時）暴露方式，測定得到典型抗生素廢水對斑馬魚的急性毒性，以96h?LC₅₀（典型抗生素廢水的體積百分比%）描述，采用長期（20天）暴露方式，亞急性毒性以魚體的一組抗氧化指標表示。

判斷典型抗生素廢水對斑馬魚是否具有毒性的判據(jù)為：急性毒性測定得到96h?LC₅₀（典型抗生素廢水的體積百分比%）；亞急性毒性為典型抗生素廢水對斑馬魚魚體抗氧化指標的影響是否顯著。如果暴露組與空白對照組差異顯著：認為典型抗生素廢水有亞急性生物毒性。暴露組與空白對照組差異不顯著：認為典型抗生素廢水無亞急性生物毒性。依據(jù)上述判據(jù)評估典型抗生素廢水對斑馬魚的毒性類型以及毒性水平，從而可以確定典型抗生素廢水的毒性類型（屬于急性毒性還是亞急性毒性）和毒性水平（毒性的顯著性水平）。

本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)：

一種利用斑馬魚測試典型抗生素廢水毒性的方法，該方法采用斑馬魚體內(nèi)試驗方法，分別利用短期（96小時）和長期（20天）暴露方式描述典型抗生素廢水對斑馬魚的急性毒性和亞急性毒性，判斷典型抗生素廢水對斑馬魚是否具有毒性的判據(jù)為：急性毒性以96h?LC50（典型抗生素廢水體積百分比%）描述；亞急性毒性以一組抗氧化指標描述；

利用短期（96小時）暴露方式，測定得到典型抗生素廢水對斑馬魚的急性毒性，急性毒性測定得到96h?LC₅₀（典型抗生素廢水體積百分比%）；以96h?LC₅₀描述急性毒性；

利用長期（20天）暴露方式，亞急性毒性以魚體的一組抗氧化指標表示，然后利用顯著性t檢驗，檢驗暴露組與空白對照組間的差異，當t＜t_0.05(n)，即P＞0.05時，認為無顯著性差異；當t_0.05(n)≤t＜t_0.01(n)，即0.01＜P≤0.05時，認為差異顯著；當t＞t_0.01(n)，即P≤0.01時，認為差異極顯著；

本測試方法為，如果暴露組與空白對照組差異顯著（0.01<P<0.05或者P<0.01），則認為典型抗生素廢水有亞急性生物毒性，若暴露組與空白對照組差異不顯著，則認為典型抗生素廢水無亞急性生物毒性。

所述的利用斑馬魚測試典型抗生素廢水毒性的方法，它包括以下具體步驟：

(1)準備測試生物，選用斑馬魚（Zebra?Fish）為受試生物，雌雄個體各半，斑馬魚經(jīng)5%食鹽水消毒后，用曝氣48h的脫氯自來水在實驗室馴養(yǎng)7天，在預實驗前一天和試驗期間不予喂食，避免魚餌對測試結(jié)果產(chǎn)生影響；

(2)準備測試條件，試驗溶液pH值為7.0～8.5；總硬度為240～250mg/L（以CaCO₃計），試驗溫度為23～25℃；溶解氧高于5mg/L；采用自然光照；試驗周期為96h（預實驗和急性毒性實驗持續(xù)時間）或20d（亞急性毒性實驗持續(xù)時間）；試驗方式為靜水式（每24h更換一次試液），每天至少測定1次試驗溶液的水溫、硬度、pH值、溶解氧含量；