本申請是申請號為201210129986.3、申請日2012年4月27日的中國專利申請的分案申請。?

技術領域

本發明屬生命科學和生物技術領域，特別是一種基因檢測試劑盒，采用探針實時熒光定量PCR技術，能夠對人類急性淋巴細胞白血病（ALL）、急性粒細胞白血病（AML）以及少數慢性粒細胞白血病（CML）患者體內BCR/ABL(m-bcr)融合基因表達水平進行檢測，可有效的節約檢測時間，提高檢測精度。?

背景技術

白血病是一類造血干細胞異常的克隆性惡性疾病。其克隆中的白血病細胞失去進一步分化成熟的能力而停滯在細胞發育的不同階段。在骨髓和其他造血組織中白血病細胞大量增生積聚并浸潤其他器官和組織，同時使正常造血受抑制，臨床表現為貧血、出血、感染及各器官浸潤癥狀。根據白血病細胞的成熟程度和自然病程，白血病可分為急性和慢性兩大類。急性白血病病情進展迅速，自然病程僅有數周至數月。一般可根據白血病細胞系列歸屬分為急性髓系白血病(AML)和急性淋巴細胞白血病(ALL)兩大類。而慢性白血病的發生是由于有功能的已分化成熟細胞過度增生，因此慢性白血病是一種由于信號傳導不良或細胞增殖失控所至的疾患，而非成熟障礙所至。慢性白血病常見有慢性粒細胞性白血病（CML）、慢性淋巴細胞性白血病（CLL）。由于白血病類型不同，治療方案及預后亦不盡相同，因此診斷成立后，應進一步分型。關于人類白血病的病因與發病機理，至今仍未完全明了。已知病因有感染因素、電離輻射、化學物質，遺傳因素及免疫功能異常等。目前認為白血病病因是以上各種因素相互作用的結果。?

近十余年來慢性粒細胞白血病(CML)的分子生物學研究不斷有新的進展，其中之一就是陸續報道了二十余例BCR(breakpoint?cluster?region)基因上的斷裂點不在M-bcr(majorbreakpoint?duster?region)而位于m-bcr(minor?breakpoint?dusterregion)、表達相對分子質量為190000BCR/ABL融合蛋白的CML(P190CML)。P190CML是一個罕見的CML分子亞型。除了20％-50％的Ph⁺ALL表達與CML一樣的P21O以外，50％-80％的PML-ALL患者BCR基因中的斷裂點不在M-bcr內，而位于其5’端上游至少30kb處，即長70kb的第1內含子3’端的一半序列上，這一長35kb的區域，最初又確定了兩個片段：bcr-2和?bcr-3，其中bcr-3位于bcr-2的5端上游16kb，現該兩個片段已統稱為m-bcr或mbcrl，融合方式為ela2連接，轉錄成7.5kb或7.0kb的mRNA，翻譯成相對分子質量為190000或185000的蛋白產物P190^bcr-abl或P185^bcr-abl。由于早期僅發現ALL和急性髓系白血病(AML)表達P190，因此m-bcr被稱為ALL型斷裂點(ALL-type?breakpoint)，P190被認為是特有的(ALL-specific，稱為Ph⁺bcr-ALL或P190ALL)或急性白血病相關的(AL-associated)。P190CML發現后不久，即有報道P210CML患者進入加速期、急變期時也可出現P190，提示P190可能與P210CML疾病進展有關。后又發現70％以上慢性期P210CML患者初診時也可檢測到數量不等的P190。因而，導致產生P190的BCR-ABL連接類型并非是Ph⁺AL特有的。但是P190比P2l0的致癌能力更高,表達更傾向于導致AL表型是無疑的。因此，從CML中篩選出P190個體對于后期的治療顯得尤為重要。?

在實際應用中，用于檢測BCR/ABL(m-bcr)融合基因表達水平的方法主要為熒光原位雜交，盡管該法較為直觀，但是試驗過程過于繁瑣，需要的試劑種類繁多，費時費力，且試驗結果需要經驗豐富的專家來判讀，結果判讀存在較大的主觀性，因而一定程度上限制了該法的應用。?