技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)檢測領(lǐng)域，涉及利用DNA分子標(biāo)記技術(shù)鑒別綿羊肉和山羊肉的方法。

背景技術(shù)：

羊肉通常是綿羊肉和山羊肉的統(tǒng)稱，是我國傳統(tǒng)的食藥兩用、營養(yǎng)豐富的肉類食品，一直以來深受消費(fèi)者的喜愛。綿羊肉和山羊肉都具有蛋白含量高、低脂肪和低膽固醇的特性，但兩者存在較大差異。山羊肉膻味重，膽固醇含量比綿羊肉低；綿羊肉比山羊肉脂肪含量高而口感細(xì)膩，膻味輕；中醫(yī)認(rèn)為，山羊肉屬涼性，綿羊肉屬熱性，適合不同的人群食用。因此，受不同地區(qū)飲食習(xí)慣等因素的影響，消費(fèi)者形成了對綿羊肉和山羊肉的選擇性消費(fèi)，直接引起綿羊肉和山羊肉的價(jià)格差異。

近年來，受羊肉消費(fèi)需求急劇上升、飼養(yǎng)成本增加等因素影響，我國羊肉價(jià)格顯著上漲。特別是市場流通的日益發(fā)達(dá)，羊肉經(jīng)冷凍后再出售已是現(xiàn)代市場營銷的主要手段。由于羊肉冷凍后通過感官檢查很難區(qū)分其真假，一些不法商販以價(jià)格低廉的禽肉冒充，損害了消費(fèi)者利益。傳統(tǒng)的感觀檢查和理化檢驗(yàn)方法難以有效完成對綿羊肉和山羊肉的鑒別，也無法鑒別以禽肉假冒的冷凍羊肉，給當(dāng)前的肉品監(jiān)管工作提出了嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。

PCR全稱聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase?Chain?Reaction)，是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法，由高溫變性、低溫退火(復(fù)性)及適溫延伸等幾步反應(yīng)組成一個(gè)周期，循環(huán)進(jìn)行，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡便、省時(shí)等特點(diǎn)。

凝膠電泳技術(shù)是分離、鑒定、純化DNA分子的常用方法。根據(jù)電泳中所用介質(zhì)的不同，主要有瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳。聚合后的凝膠形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，具有濃縮效應(yīng)、電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)，能夠有效分離不同分子量大小的DNA片斷。瓊脂糖凝膠分離DNA片度大小范圍較廣，不同濃度瓊脂糖凝膠可分離長度從200bp至近50kb的DNA片段，采用水平裝置電泳。聚丙烯酰胺分離小片段DNA效果較好，其分辯力極高，甚至相差1bp的DNA片段都能分開，采用垂直裝置電泳。

在動物源類肉品的種屬鑒定方面，采用的遺傳標(biāo)記主要來源于線粒體基因組(常用的包括細(xì)胞色素b基因、12S?rRNA基因、16S?rRNA基因和控制區(qū)序列)，但未見應(yīng)用基因組遺傳標(biāo)記鑒別綿羊肉和山羊肉的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的是構(gòu)建一種快速有效的綿羊肉和山羊肉的分子鑒別方法。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，擬采用如下技術(shù)方案：

本發(fā)明一方面涉及一種鑒別綿羊肉和山羊肉的方法，包括以下步驟：提取待測樣品基因組DNA；采用上游引物：F5′-TCTCAGCCCAACTCCTGACACCATG-3′，下游引物：R5′-TGGGCAATTTTAAATGAGCAACCTT-3′，以所提取的樣品基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增；采用凝膠電泳對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行鑒定。

在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述的提取待測樣品基因組DNA的方法為苯酚-氯仿法。

在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述的凝膠電泳是聚丙烯酰胺凝膠電泳。

在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述的凝膠電泳還包括標(biāo)準(zhǔn)樣品的凝膠電泳，所述的標(biāo)準(zhǔn)樣品是綿羊肉和/或山羊肉相應(yīng)基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。

本發(fā)明另一方面還涉及一種試劑盒，其包括上游引物：F5′-TCTCAGCCCAACTCCTGACACCATG-3′，下游引物：R5′-TGGGCAATTTTAAATGAGCAACCTT-3′。

在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述試劑盒中任選包括DNA聚合酶，Taq酶。

采用本發(fā)明的技術(shù)方案，能夠有效和可靠地鑒別綿羊肉和山羊肉，在食品安全、打擊假冒偽劣產(chǎn)品中具有廣范的應(yīng)用。

附圖說明：

圖1：新鮮和冷凍肌肉樣品PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的1％瓊脂糖凝膠電泳圖譜。圖中，泳道M為標(biāo)準(zhǔn)分子量參照DL2000，從上至下片斷大小依次為2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp和100bp；泳道1為新鮮肉用山羊肉，泳道2為新鮮絨山羊肉，泳道3為新鮮奶山羊肉，泳道4為冷凍肉用山羊肉，泳道5為冷凍絨山羊肉，泳道6為冷凍奶山羊肉；泳道7為新鮮肉用綿羊肉，泳道8為新鮮毛用綿羊肉，泳道9為新鮮肉毛兼用綿羊肉，泳道10為冷凍肉用綿羊肉，泳道11為冷凍毛用綿羊肉，泳道12為冷凍肉毛兼用綿羊肉；泳道13為新鮮雞肉，泳道14為新鮮鴨肉，泳道15為新鮮鵝肉，泳道16為冷凍雞肉，泳道17為冷凍鴨肉，泳道18為冷凍鵝肉。