技術領域

本發明屬于獸醫生物新醫藥技術領域，涉及一株禽源大腸桿菌疫苗株NN株及其應用。?

背景技術

鴨大腸桿菌病是一種急性敗血性傳染病，主要侵害2-6周齡的雛鴨。不管是原發性或繼發性，其主要特征為發生心包炎、肝周炎、氣囊炎、輸卵管炎的病變。眼炎型的多見于1心周齡的雛鴨；關節炎型的多于7-10日齡的雛鴨；腦炎型的多見于1周齡雛鴨；漿膜型的多見于2~6周齡雛鴨。隨著養鴨業的日益發展和集約化程度的提高及鴨大腸桿菌病的發生日趨嚴重，鴨大腸桿菌病給養鴨業造成了嚴重的經濟損失，尤其是近年來，在我國種鴨的細菌病中大腸桿菌病顯著增多。據調查顯示，鴨大腸桿菌病在我國不同類型的養鴨場中普遍存在，流行廣泛。?

關于雞源致病性大腸桿菌的血清型報道較多，而鴨源致病性大腸桿菌血清型的報道較少，由于大腸桿菌的血清型較為復雜，給防治工作帶來一定的困難。據有關報道，對鴨有致病性的以O1、O2、O35、O36、O73、O78為主，而且不同地區血清學差別很大。因此，在大腸桿菌的防控上，大家都致力于制備融合株，制備多價疫苗，以此期望用一種疫苗同時對多個血清型的大腸桿菌病能產生保護。關于天然融合株，由劉吉山等首次分離報道，當時就提出這為疫苗制備時涵蓋更多細菌血清型提供了方便條件。?

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對禽源大腸桿菌血清型眾多，不同地區甚至不同養殖場的流行菌株都不盡相同，為了滿足一種疫苗多種保護的需求，從臨床發病鴨群中分離篩選出一株天然融合株，該菌株制備疫苗對大腸桿菌血清型O1和O2引起的大腸桿菌病均能產生良好的保護。?

本發明所要解決的技術問題是通過如下途徑實現的：?

本發明提供一種禽源大腸桿菌疫苗株NN株，微生物保藏號是：?CGMCC?No.?7670，分類命名：大腸埃希氏菌(Escherichia?coli)；保藏時間2013-5-31；保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏地點：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所。

本發明提供的E.coli?NN疫苗株的來源于：?

2009年10月分離于安徽省某大型鴨場，具有典型肝周炎、心包炎、輸卵管炎、氣囊炎及卵黃性腹膜炎等病變,通過革蘭氏染色、菌落形態觀察、培養特性試驗和生化試驗鑒定，確定為大腸桿菌。應用大腸埃希菌O抗原定型血清鑒定為O1/O2。

E.coli?NN株具有如下特性：?

（1）培養特性??麥康凱培養基上的圓形、濕潤、光滑的紅色單個菌落；伊紅美藍培養基上生成暗紫紅色或紫黑色具有金屬光澤的菌落；革蘭氏陰性小桿菌。

（2）生化特性??可發酵碳水化合物，如葡萄糖、蔗糖、乳糖、果糖、甘露糖、阿拉伯糖等；枸櫞酸鹽利用、V-P試驗均為陰性；M-R試驗、硝酸鹽還原、靛基質氧化酶為陽性?

（3）血清型??通過玻片凝集試驗分離株與單因子血清O1和O2都發生凝集，鑒定此株細菌為天然融合株O1/O2株。

（4）毒力??攻毒劑量為1×10⁹CFU/只時，可致10只21日齡雛鴨全部死亡。?

本發明提供的禽源大腸桿菌NN株有益效果如下：?

分離自自然發病鴨，具有流行血清型，與單因子血清O1和O2都發生凝集，一株天然融合株，以NN株為疫苗株制成的滅活疫苗對兩種血清型菌株引起的大腸桿菌病均有不同程度的保護。

具體實施方式

下面結合具體實施例來進一步描述本發明，但這些實施例僅是范例性的，并不對本發明提供的毒株應用領域和形式構成任何限制。?

實施例1　禽源大腸桿菌NN株分離鑒定

一、細菌的分離培養

1、?病料分離?采用無菌操作，取病鴨的心臟、肝臟，用滅菌的接種環將病料接種于營養瓊脂平板上，37℃，培養18～24h，觀察結果。

2、?純化培養??E.coli分離株接種TSA培養基上，37℃培養箱中培養24?h后長出圓形、光滑、隆起、濕潤半透明的近無色的菌落；麥康凱培養基上的圓形、濕潤、光滑的紅色單個菌落；接種于伊紅美藍培養基上，37℃，培養?18～24h生成暗紫紅色或紫黑色具有金屬光澤的菌落；革蘭氏染色觀察；將革蘭氏染色形態為：兩端鈍圓、散在或成對、無芽孢的紅色小桿菌。?

二、細菌鑒定

1、生化鑒定