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[發明專利]一種檢測人白介素6的電致化學發光免疫傳感器及其制備方法和檢測方法有效

專利信息
申請號: 201310450342.9 申請日: 2013-09-27
公開(公告)號: CN103487573A 公開(公告)日: 2014-01-01
發明(設計)人: 毛昌杰;胡曉煒;石陽陽;王程;殷暢;劉蘋貞;張勝義;牛和林;宋吉明 申請(專利權)人: 安徽大學
主分類號: G01N33/531 分類號: G01N33/531;G01N33/53;G01N21/76
代理公司: 安徽省合肥新安專利代理有限責任公司 34101 代理人: 何梅生
地址: 230039*** 國省代碼: 安徽;34
權利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關鍵詞: 一種 檢測 白介素 化學 發光 免疫 傳感器 及其 制備 方法
【權利要求書】:

1.一種檢測人白介素6的電致化學發光免疫傳感器,其特征在于:所述免疫傳感器是在玻碳電極的表面覆蓋有氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點復合物膜,在所述氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點復合物膜的表面通過1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺處理后固定有人白介素6抗體。

2.根據權利要求1所述的檢測人白介素6的電致化學發光免疫傳感器,其特征在于:所述氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點復合物膜是以苯胺和氧化石墨烯為原材料,通過原位反應得到氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列復合物,再和硒化鎘量子點混合后獲得。

3.根據權利要求1或2所述的檢測人白介素6的電致化學發光免疫傳感器的制備方法,其特征在于按如下步驟進行:

步驟一、將50ul的苯胺溶于20ml濃度為1mol/L的濃硫酸溶液中,超聲處理0.5h后獲得苯胺的硫酸溶液;向20ml濃度為0.5mg/ml的氧化石墨烯溶液中滴加所述苯胺的硫酸溶液,室溫下攪拌30min后,再加入0.1512g過硫酸銨,持續攪拌12h,然后用去離子水離心洗滌至pH為6~7,65℃下真空干燥,獲得墨綠色產物,即為氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列復合物,以去離子水為溶劑,將氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列復合物配制成濃度為0.5mg/ml的氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列復合物溶液;

步驟二、將步驟一所制得的氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列復合物溶液與以去離子水為溶劑、濃度為8.2×10-5mol/L硒化鎘量子點溶液按體積比1:3混合,獲得氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點復合物溶液;

步驟三、將玻碳電極依次用中位粒徑為1.0μm、0.3μm和0.05μm的三氧化二鋁拋光粉拋光至鏡面,然后超聲清洗,并用氮氣吹干,得備用玻碳電極;

步驟四、在步驟三制得的備用玻碳電極上滴加10μl步驟二所制得的氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點復合物溶液,室溫晾干后在備用玻碳電極上形成氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點復合物膜,再滴加10μl由20-30mg/ml1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽和10-20mg/ml?N-羥基琥珀酰亞胺組成的混合溶液于所述氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點復合物膜的表面,靜置20-30min,得中間樣;

步驟五、將步驟四所制得的中間樣浸入以濃度為10mmol/ml的pH7.4磷酸鹽緩沖液為溶劑、濃度為0.1mg/ml的人白介素6抗體的溶液中反應12-20小時,取出后用濃度為10mmol/ml的pH7.4磷酸鹽緩沖液清洗,再浸入質量濃度為2-3%的牛血清蛋白中封閉1-2小時,取出清洗即得檢測人白介素6的電致化學發光免疫傳感器。

4.一種利用權利要求3所述檢測人白介素6的電致化學發光免疫傳感器的檢測方法,其特征是按如下步驟獲得待測人白介素6樣品濃度:

步驟a、將所述檢測人白介素6的電致化學發光免疫傳感器浸入10ul待測人白介素6樣品中,并在37℃下溫育50分鐘后取出清洗,得待測免疫傳感器;

步驟b、將步驟a所得的待測免疫傳感器在含有0.1mol/L?K2S2O8和0.1mol/L?KCl的0.1mol/L的pH7.4磷酸鹽緩沖液中進行電致化學發光的測試,獲得發光強度,利用發光強度與待測人白介素6樣品濃度的標準關系曲線,判斷待測人白介素6樣品的濃度。

5.根據權利要求4所述的檢測方法,其特征是:所述標準關系曲線是通過對以濃度分別為0.0005ng/ml、0.01ng/ml、0.1ng/ml、1ng/ml和10ng/ml的人白介素6樣品所制備的待測免疫傳感器進行電致化學發光的測試,獲得各濃度人白介素6樣品所對應的發光強度,然后以人白介素6樣品的濃度的對數值為橫坐標、以發光強度為縱坐標進行擬合。

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