技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及鴨病毒性肝炎病毒、鴨病毒性肝炎滅活疫苗及其制備方法。?

背景技術(shù)

鴨病毒性肝炎病是一種主要侵害雛鴨的急性、敗血性、接觸性傳染病。該病主要感染7日齡內(nèi)雛鴨，發(fā)病后為急性經(jīng)過，發(fā)病率可達(dá)100%，死亡率可高達(dá)80～100%。10日齡以上的鴨為隱形感染經(jīng)過，死亡率隨著日齡的增大而降低。鴨病毒性肝炎病已經(jīng)對養(yǎng)鴨業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失，成為了養(yǎng)鴨業(yè)危害最大的疫病。?

該病在世界各地均有爆發(fā)，且常造成大面積流行，主要是危害20日齡以內(nèi)的雛鴨，并且造成7日齡以內(nèi)鴨100%發(fā)病死亡。然而對于雛鴨，其免疫系統(tǒng)發(fā)育尚不完善，疫苗免疫在實(shí)踐操作中存在諸多困難因素和免疫應(yīng)答不理想的實(shí)際問題。因此，制備特異性高免蛋黃抗體預(yù)防和控制鴨病毒性肝炎疾病，成為控制本病暴發(fā)流行的最經(jīng)濟(jì)有效的方法。?

然而，目前國內(nèi)已經(jīng)上市的鴨病毒性肝炎高免抗體存在效價不穩(wěn)定、鴨胚可以垂直傳播某些同源疾病、鴨胚質(zhì)量不合格、鴨胚蛋黃抗體生產(chǎn)工藝存在隱患等諸多問題。因此，有關(guān)鴨病毒性肝炎高免抗體的研究還有待進(jìn)一步改進(jìn)。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在至少在一定程度上解決上述技術(shù)問題之一。為此，本發(fā)明的一個目的在于提出一種鴨病毒性肝炎病毒、鴨病毒性肝炎滅活疫苗及其制備方法。?

本發(fā)明是基于發(fā)明人的下列發(fā)現(xiàn)而完成的：發(fā)明人首先從山東某鴨廠，采集患病鴨肝臟組織，配以滅菌PBS進(jìn)行研磨，過濾離心之后取上清液，經(jīng)0.22um微孔濾膜過濾除菌后，接種11～13日齡SPF雞胚尿囊腔，37攝氏度下孵育，棄去48小時之內(nèi)的死亡雞胚，收集48～144小時內(nèi)死亡的雞胚，采集尿囊液及羊水，分離得到一株鴨病毒性肝炎病毒，該病毒在經(jīng)過滅活后可以用作制備鴨病毒性肝炎滅活疫苗，還可以進(jìn)一步利用制備得到的鴨病毒性肝炎滅活疫苗制備與該疫苗特異性結(jié)合的抗體，該疫苗和抗體均可用于鴨病毒性肝炎的治療和預(yù)防。?

為此，在本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明提出了鴨病毒性肝炎病毒，該病毒以保藏號CGMCC?No.7804，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例，鴨病毒性肝炎病毒是從患有鴨病毒性肝炎疾病的鴨的肝臟中分離得到，其分離得到的鴨病毒性肝炎病毒株毒性好，具有良好的免疫原性，可作為滅活疫苗生產(chǎn)毒株及檢驗(yàn)毒種，根據(jù)本發(fā)明一個實(shí)施例，利用該鴨病毒性肝炎病毒生產(chǎn)鴨病毒性肝炎滅活疫苗，有效提高鴨病毒性肝炎滅活疫苗的免疫原性，從而進(jìn)一步提高鴨病毒性肝炎滅活疫苗安全性及免疫保護(hù)期。?

在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提出了上述鴨病毒性肝炎病毒在制備鴨病毒性肝炎滅活疫苗中的用途，在本發(fā)明一個實(shí)施例中，根據(jù)鴨病毒性肝炎病毒交叉免疫保護(hù)試驗(yàn)證明，該鴨病毒性肝炎病毒具有很好的交叉免疫保護(hù)作用。因此利用該鴨病毒性肝炎病毒生產(chǎn)鴨病毒性肝炎滅活疫苗，可以有效提高鴨病毒性肝炎滅活疫苗的免疫原性，從而進(jìn)一步提高鴨病毒性肝炎滅活疫苗免疫保護(hù)期和免疫效果。?

在本發(fā)明的再一方面，本發(fā)明提出了一種鴨病毒性肝炎滅活疫苗，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例，該鴨病毒性肝炎滅活疫苗包括滅活的鴨病毒性肝炎病毒。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例，該鴨病毒性肝炎滅活疫苗的免疫持續(xù)期至少可以維持4個月。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例，該鴨病毒性肝炎滅活疫苗可在2～8攝氏度下保存12個月，因此該疫苗具有良好的穩(wěn)定性。?

根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例，上述鴨病毒性肝炎滅活疫苗是被滅活的，可以采用的滅活劑種類并不受特別限制，只要可以有效破壞鴨病毒性肝炎病毒的核酸結(jié)構(gòu)以及使蛋白質(zhì)變性即可，但不破壞鴨病毒性肝炎病毒的抗原性及血凝性。根據(jù)本發(fā)明一個實(shí)施例，所采用的滅活劑為甲醛，甲醛可以有效破壞鴨病毒性肝炎病毒的DNA結(jié)構(gòu)，進(jìn)而達(dá)到滅活鴨病毒性肝炎病毒的目的。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例，所采用的滅活劑甲醛終濃度并不受特別限制，只要能夠有效滅活鴨病毒性肝炎病毒即可。對所述鴨病毒性肝炎病毒進(jìn)行滅活可以包括：在37攝氏度下，利用終濃度為0.1%～0.3%的甲醛對鴨病毒性肝炎病毒培養(yǎng)液進(jìn)行滅活處理48小時。由此可以有效對鴨病毒性肝炎病毒進(jìn)行滅活。?

在本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明提出了一種制備鴨病毒性肝炎滅活疫苗的方法，該方法可以包括：對上面所述的鴨病毒性肝炎病毒進(jìn)行滅活，以便獲得經(jīng)過滅活的鴨病毒性肝炎病毒；利用經(jīng)過滅活的鴨病毒性肝炎病毒制備水相；以及將水相和油相按照體積比為1：3進(jìn)行混合乳化攪拌，以便獲得該鴨病毒性肝炎病毒滅活疫苗。由此，有效提高鴨病毒性肝炎滅活疫苗的免疫原性，從而進(jìn)一步提高鴨病毒性肝炎滅活疫苗免疫保護(hù)期和免疫效果。?