技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因診斷技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種以微陣列基因芯片技術(shù)為平臺(tái)技術(shù)的無創(chuàng)產(chǎn)前診斷先天性耳聾遺傳病的方法。?

背景技術(shù)

聾病是影響人類健康和造成人類殘疾的常見原因，我國現(xiàn)有2000多萬聾啞人，占?xì)埣踩丝倲?shù)1/3，并以每年新生兒3萬的速度增長。耳聾發(fā)生的原因、是否具有遺傳性、生育或再次生育是否安全，是耳聾患者及耳聾家庭極為關(guān)心的問題。據(jù)各國統(tǒng)計(jì)，有1/2000(0.05％)一1/1000(0.1％)的兒童出生時(shí)為極重度耳聾；同時(shí)，一半以上的兒童期耳聾是由于遺傳因素造成的。另外在大量的遲發(fā)性聽力下降患者中，亦有許多患者由自身的基因缺陷致病，或由于基因缺陷和多態(tài)性造成對(duì)致聾環(huán)境因素易感性增加而致病。?

在遺傳性耳聾中，有70％為NSHI(nonsyndromie?hearingim?pairment非綜合征型耳聾)，大約75％～85％的NSHI表現(xiàn)為常染色體隱性遺傳模式，15％～24％為常染色體顯性遺傳模式，其余1％～2％為X連鎖遺傳模式。隨著人類基因組計(jì)劃的完成以及對(duì)耳聾疾病致病機(jī)制的研究不斷深入，遺傳性耳聾的病因?qū)W研究有了很大進(jìn)展，目前至少有60余個(gè)耳聾基因被克隆，這些發(fā)現(xiàn)提示我們遺傳性耳聾具有很高的遺傳異質(zhì)性，遺傳性耳聾的基因診斷涉及到多個(gè)基因的檢測，從而加重了遺傳性耳聾分子診斷的難度。?

大量的研究表明，GJB2、SLC26A4(PDS)和線粒體基因(mtDNA)的病理性突變導(dǎo)致了大部分的遺傳性耳聾，并被證明是中國聾啞人群三種最常見的致聾基因突變。利用基因診斷技術(shù)對(duì)這三個(gè)常見基因檢測，可在大約70％的遺傳性耳聾患者發(fā)現(xiàn)致聾基因突變，這不僅可以耳聾患者明確病因，還使耳聾的遺傳咨詢與產(chǎn)前診斷成為可能。這不僅使耳聾患者明確病因，還為耳聾的遺傳咨詢提供了理論依據(jù)及科學(xué)手段，使先天性耳聾產(chǎn)前診斷結(jié)果更客觀準(zhǔn)確。?

目前，可用于先天性耳聾產(chǎn)前診斷的技術(shù)主要有聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、熒光原位雜交及基因芯片等技術(shù)。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase?chain?reaction，PCR)該技術(shù)是分子實(shí)驗(yàn)室重要的診斷技術(shù)之一，在體外擴(kuò)增DNA片段用于遺傳學(xué)分析，包括巢式PCR、多重PCR、熒光PCR、熒光定量PCR等。主要用于由于基因缺失而引起的疾病的診斷和多態(tài)性分析，即在致病基因附近尋找?guī)讉€(gè)與其緊密連鎖的DNA多態(tài)性位點(diǎn)，通過連鎖分析進(jìn)行診斷和攜帶者檢測。?但是PCR技術(shù)受到擴(kuò)增效率、等位基因脫扣、污染的可能的影響可能導(dǎo)致誤診，并且PCR僅能檢測已知的異常。熒光原位雜交(fluorescence?in?situ?hybridization，F(xiàn)ISH)該技術(shù)是利用熒光素標(biāo)記的探針與DNA片段特異性雜交，探針與特異DNA片段結(jié)合形成的雜交分子可以在熒光顯微鏡熒光激發(fā)下顯示熒光信號(hào)，依據(jù)判定信號(hào)的有無及類型達(dá)到診斷染色體病的目的。此方法無需細(xì)胞培養(yǎng)，僅24小時(shí)即可得到結(jié)果，污染機(jī)率小、信號(hào)直觀、檢測時(shí)間短，應(yīng)用較廣泛。熒光原位雜交的探針包含以下幾種：著絲粒探針(combining?centromere?probe，CEP)、位點(diǎn)特異性探針(focus-specific?probe，LSI)、端粒探針(telomere?probe，Tel)、全染色體涂抹探針(whole?chromosome?probe，WCP)和跨斷裂點(diǎn)探針(span?break-point?probe)。應(yīng)用不同類型的探針可以篩查先天性耳聾疾病基因攜帶者進(jìn)行遺傳學(xué)診斷。?

PCR及FISH技術(shù)即成為大家公認(rèn)并相繼使用的方法。但是這兩種方法都存在本身的缺陷，PCR僅可檢測已知的異常。熒光原位雜交技術(shù)是利用熒光素標(biāo)記的探針與染色體特異性雜交，依據(jù)顯微鏡觀察熒光信號(hào)判定結(jié)果正常與否，信號(hào)直觀、檢測時(shí)間短。但是由于檢驗(yàn)的樣本來源極為有限，通常僅有1-2個(gè)卵裂球細(xì)胞。FISH技術(shù)僅可檢測少量染色體及基因。然而先天性耳聾疾病的發(fā)生涉及多條染色體的多個(gè)基因，F(xiàn)ISH技術(shù)并不能滿足產(chǎn)前先天性耳聾篩查的需要。?