技術領域

本發明涉及一種生產大鯢多肽粉保肝膠囊的方法，屬于生物醫藥領域。?

背景技術

做為現存唯一的一種大型兩棲動物，大鯢正被人們深入的認知和研究著，目前人們對大鯢的研究主要集中在生態調查，形態解剖，人工繁殖和養殖等方面。隨著人工繁養的成功，大鯢在學術上研究的重要意義進一步得到升華，人們對大鯢的食用價值和功效不斷的認識不斷深入。然而遺憾的是，稱得上大鯢的深加工產品寥寥無幾。有的市面上所謂大鯢多肽的產品其成分也就是大鯢蛋白質而已。由于肽較生物體的其他物質（含蛋白質和氨基酸），有著更多更強的活性和多樣性，有專家稱“21世紀將是肽的世紀”。多肽可以通過合成和提取得到，但前者的安全性備受質疑，后者存在生產成本及效率與溶劑殘留方面的不足，人們對通過環境友好、綠色安全的生物技術制備多肽情有獨鐘。于是乎，近年來，國內對各種各樣的多肽生物技術制備方法研究相當不少。其中也有關于大鯢蛋白酶水解的研究，為數不多的大鯢多肽的研究其制備限于酶解條件優化，其功能限于緩解體力疲勞等方法；中國專利公開“CN102676622A”公開了“大鯢納米肽及大鯢酒”的專利申請，從中可以看到，其方法僅僅是通過得到納米大鯢粉經過簡單的酶解得到大鯢納米肽和較多的游離氨基酸，其所得產物值得商榷，其功能也不很明確。?

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供一種以飼養中國大鯢為原料經可控酶解得一種生產大鯢多肽保肝膠囊的方法。

本發明的上述目的是通過如下技術方案實現的：

一種生產大鯢多肽保肝膠囊的方法，包括如下步驟：

A.以新鮮大鯢肉為原料，經干燥處理，得大鯢肉干，將其粉碎得大鯢肉粉，去除脂肪，揮干溶劑，得到脫脂大鯢粉；

B.采用復合酶制劑對脫脂大鯢粉進行可控酶解，得到酶解液；

C.將上述酶解液離心，過濾，取濾液，然后經兩次超膜過濾，得大鯢多肽液；

D.將大鯢多肽液濃縮，干燥，碾碎過篩，得大鯢多肽粉；

E．取100-120目大鯢多肽粉，填充膠囊，得到大鯢多肽保肝膠囊。

在本發明中，所述大鯢多肽的生產方法的步驟A中，干燥可以采用低溫干燥的方式，其溫度控制在60-65℃，這樣操作可以使其本身所含大鯢蛋白及多肽、氨基酸損失最小；粉碎后，過40-80目篩，得大鯢肉粉；可以采用可使用于食用油浸提的6^#溶劑油處理去除脂肪，其中食用油浸提領域所使用的眾所周知溶劑，主要成分是正己烷。

進一步的，在步驟B中，采用的復合酶制劑為動物水解蛋白酶和中性蛋白酶（質量比2：1）的復合酶，在1：10料水比（質量體積比?m/v）情況下，優選為1:3，加入10萬活力單位上述復合酶，加入量為原料（脫脂大鯢粉）的0.1%（質量比）；復合酶粉采用熱水預處理，熱水用量為復合酶粉質量的10-50倍，溫度為50℃，預處理時間為10分鐘；預處理后攪勻過濾，加入到酶解體系，酶解條件為于自然pH、45-50℃條件下酶解1-1.5小時。

在本發明中，所述動物水解蛋白酶本身是復合酶，含有內切酶和外切酶、風味酶，研究表明，該酶水解較可，隨著水解的進行，體系pH值有所降低，水解減緩，添加中性蛋白酶后，更加合適本可控酶解反應。

進一步的，在步驟C中，所述兩次超膜過濾的第一次采用截留2000道爾頓分子量的膜過濾，取截留液進行第二次4000道爾頓分子量截留，取濾過液，得2000-4000道爾頓分子量范圍的大鯢多肽液。

進一步的，在步驟D中，將多肽液于旋轉蒸發儀上進行真空薄膜濃縮，然后于冷凍干燥機內凍干。

動物試驗表明，灌胃飼養中國大鯢多肽粉后,四氯化碳誘導肝損傷小鼠體重明顯增加,當其劑量為400mg/kg.BW和800mg/kg.BW時,?小鼠血清中谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶活力顯著低于四氯化碳模型對照組,肝組織病理結果為陽性；同時飼養中國大鯢多肽粉可使乙醇誘導肝損傷小鼠血清中還原型谷胱甘肽含量顯著高于乙醇模型對照組，丙二醛、甘油三酯含量顯著低于乙醇模型對照組，肝組織病理結果為陽性。飼養中國大鯢多肽粉對四氯化碳及乙醇引起的肝損傷有輔助保護作用。