技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及乳腺癌細(xì)胞，尤其是涉及乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的核酸適體LXL-1及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

乳腺癌是女性最常見的癌癥，主要包括導(dǎo)管癌和小葉癌。2011年美國CA（A?Cancer?Journal?for?Clinicians）公布的最新統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，美國2011年預(yù)計(jì)將有230480例女性患乳腺癌，占女性新發(fā)惡性腫瘤的30%，居女性惡性腫瘤發(fā)病率第一位，并且死亡人數(shù)將達(dá)39520例。更為嚴(yán)重的是全球的乳腺癌發(fā)病率正在逐年增長。乳腺癌的診斷方法主要包括乳腺鉬靶X線攝影、乳腺彩色多譜勒超聲檢查、乳腺導(dǎo)管內(nèi)視鏡檢查、乳腺導(dǎo)管灌洗、CT和磁共振。但是這些檢測方法主要是基于形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，依然缺乏與乳腺癌相關(guān)的特異性標(biāo)志。乳腺癌的治療主要包括手術(shù)切除、化療以及放療或者幾者綜合治療等方式。但是傳統(tǒng)化療、放療的方式由于缺乏腫瘤細(xì)胞的靶向性導(dǎo)致非常嚴(yán)重的副作用。近年來發(fā)展的單克隆抗體雖然具有較高的特異性和親和力，但是抗體本身所具有的一些缺陷，如免疫原性、不穩(wěn)定性、批次間的差異性等使其在臨床上的實(shí)際應(yīng)用中具有一定的局限性。因此，找到乳腺腫瘤細(xì)胞的特異性靶標(biāo)，在腫瘤的診斷和治療中都具有重要意義。近些年發(fā)展的核酸適體探針，尤其是細(xì)胞靶向的核酸適體，能夠特異性識(shí)別包括全血樣品的復(fù)雜樣品中的癌細(xì)胞，將給腫瘤的早期特異性快速診斷和靶向治療帶來新的希望和解決途徑。

核酸適體（Tuerk,C.;Gold,L.,Systematic?evolution?of?ligands?by?exponential?enrichment:RNA?ligands?to?bacteriophage?T4DNA?polymerase.Science1990,249(4968),505-510;Ellington,A.D.;Szostak,J.W.,In?vitro?selection?of?RNA?molecules?that?bind?specific?ligands.Nature1990,346(6287),818-822）是指從人工合成的單鏈DNA/RNA文庫中篩選得到的能夠高親和性和高特異性地與靶標(biāo)分子結(jié)合的單鏈寡核苷酸。核酸適體借助氫鍵、范德華力、疏水作用等分子間作用力形成特殊的三維結(jié)構(gòu)，如發(fā)夾、假結(jié)、凸環(huán)、G-四聚體等，從而特異地識(shí)別靶物質(zhì)并影響其生物活性。核酸適體本身特有的生化特性使其在生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域具有諸多優(yōu)勢，如靶分子范圍廣、親和力與特異性強(qiáng)、合成修飾方便快速、良好的生物兼容性、無毒、體外穩(wěn)定性好等。核酸適體可以通過配體指數(shù)富集系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)(systematic?evolution?of?ligands?by?exponential?enrichment，SELEX)（Sefah,K.;Shangguan,D.;Xiong,X.;O'Donoghue,M.B.;Tan,W.,Development?of?DNA?aptamers?using?Cell-SELEX.Nat.Protocols2010,5(6),1169-1185）篩選獲得，其基本原理是在體外人工化學(xué)合成一個(gè)寡核苷酸文庫，包括RNA、ssDNA或修飾的RNA和ssDNA，通過寡核苷酸文庫與目標(biāo)分子的相互作用，結(jié)合PCR技術(shù)指數(shù)級放大與靶分子特異結(jié)合的寡核苷酸，經(jīng)過幾輪或數(shù)十輪篩選過程，獲得高親和力和高特異性的核酸適體。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一目的在于提供具有高特異性和高親和力的乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的核酸適體LXL-1。

本發(fā)明的第二目的在于提供乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的核酸適體LXL-1在與乳腺癌相關(guān)方面的應(yīng)用。

所述乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的核酸適體命名為LXL-1，其序列如下：

gaattcagtc?ggacagcgaa?gtagttttcc?ttctaaccta?agaacccgcg?gcagtttaat???60

gtagatggac?gaatacgtct?ccc???83

所述乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的核酸適體LXL-1在0℃，0.157M/L?Na⁺，0.005M/L?Mg²⁺條件下具有獨(dú)特的莖環(huán)結(jié)構(gòu)，其莖環(huán)結(jié)構(gòu)如下：

所述乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的核酸適體LXL-1的應(yīng)用如下：

1）所述乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的核酸適體LXL-1在制備乳腺癌診斷試劑中的應(yīng)用。