技術領域

本發明涉及乳腺癌細胞，尤其是涉及乳腺癌細胞MDA-MB-231的核酸適體LXL-2及其應用。

背景技術

乳腺癌是女性最常見的癌癥，主要包括導管癌和小葉癌。2011年美國CA（A?Cancer?Journal?for?Clinicians）公布的最新統計數據顯示，美國2011年預計將有230480例女性患乳腺癌，占女性新發惡性腫瘤的30%，居女性惡性腫瘤發病率第一位，并且死亡人數將達39520例。更為嚴重的是全球的乳腺癌發病率正在逐年增長。乳腺癌的診斷方法主要包括乳腺鉬靶X線攝影、乳腺彩色多譜勒超聲檢查、乳腺導管內視鏡檢查、乳腺導管灌洗、CT和磁共振。但是這些檢測方法主要是基于形態學標準，依然缺乏與乳腺癌相關的特異性標志。乳腺癌的治療主要包括手術切除、化療以及放療或者幾者綜合治療等方式。但是傳統化療、放療的方式由于缺乏腫瘤細胞的靶向性導致非常嚴重的副作用。近年來發展的單克隆抗體雖然具有較高的特異性和親和力，但是抗體本身所具有的一些缺陷，如免疫原性、不穩定性、批次間的差異性等使其在臨床上的實際應用中具有一定的局限性。因此，找到乳腺腫瘤細胞的特異性靶標，在腫瘤的診斷和治療中都具有重要意義。近些年發展的核酸適體探針，尤其是細胞靶向的核酸適體，能夠特異性識別包括全血樣品的復雜樣品中的癌細胞，將給腫瘤的早期特異性快速診斷和靶向治療帶來新的希望和解決途徑。

核酸適體（Tuerk,C.;Gold,L.,Systematic?evolution?of?ligands?by?exponential?enrichment:RNA?ligands?to?bacteriophage?T4?DNA?polymerase.Science?1990,249(4968),505-510;Ellington,A.D.;Szostak,J.W.,In?vitro?selection?of?RNA?molecules?that?bind?specific?ligands.Nature?1990,346(6287),818-822）是指從人工合成的單鏈DNA/RNA文庫中篩選得到的能夠高親和性和高特異性地與靶標分子結合的單鏈寡核苷酸。核酸適體借助氫鍵、范德華力、疏水作用等分子間作用力形成特殊的三維結構，如發夾、假結、凸環、G-四聚體等，從而特異地識別靶物質并影響其生物活性。核酸適體本身特有的生化特性使其在生物醫學應用領域具有諸多優勢，如靶分子范圍廣、親和力與特異性強、合成修飾方便快速、良好的生物兼容性、無毒、體外穩定性好等。核酸適體可以通過配體指數富集系統進化技術(systematic?evolution?of?ligands?by?exponential?enrichment，SELEX)（Sefah,K.;Shangguan,D.;Xiong,X.;O′Donoghue,M.B.;Tan,W.,Development?of?DNA?aptamers?using?Cell-SELEX.Nat.Protocols?2010,5(6),1169-1185）篩選獲得，其基本原理是在體外人工化學合成一個寡核苷酸文庫，包括RNA、ssDNA或修飾的RNA和ssDNA，通過寡核苷酸文庫與目標分子的相互作用，結合PCR技術指數級放大與靶分子特異結合的寡核苷酸，經過幾輪或數十輪篩選過程，獲得高親和力和高特異性的核酸適體。

發明內容

本發明的第一目的在于提供具有高特異性和高親和力的乳腺癌細胞MDA-MB-231的核酸適體LXL-2。

本發明的第二目的在于提供乳腺癌細胞MDA-MB-231的核酸適體LXL-2在與乳腺癌相關方面的應用。

所述乳腺癌細胞MDA-MB-231的核酸適體命名為LXL-2，其序列如下：

gaattcagtc?ggacagcgca?attgtggttc?ttaccctatc?ccttgtgttt?ggcgttcgtt????60

gcgatggacg?aatatcgtct?ccc????????????????????????????????????????????83

所述乳腺癌細胞MDA-MB-231的核酸適體LXL-2在0℃，0.157M/L?Na⁺，0.005M/L?Mg²⁺條件下具有獨特的莖環結構，其莖環結構如下：

所述乳腺癌細胞MDA-MB-231的核酸適體LXL-2的應用如下：

1）所述乳腺癌細胞MDA-MB-231的核酸適體LXL-2在制備乳腺癌診斷試劑中的應用。