[發明專利]構建能分泌表達細胞因子的轉基因飼養層細胞的方法在審
| 申請號： | 201310306415.7 | 申請日： | 2013-07-19 |
| 公開（公告）號： | CN104099369A | 公開（公告）日： | 2014-10-15 |
| 發明（設計）人： | 胡曉湘;李書萍;趙茜;李寧 | 申請（專利權）人： | 中國農業大學 |
| 主分類號： | C12N15/85 | 分類號： | C12N15/85;C12N5/10;C12N5/0735;C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產權代理有限公司 11002 | 代理人： | 王朋飛;張慶敏 |
| 地址： | 100193 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 構建 分泌 表達 細胞因子 轉基因 飼養 細胞 方法 | ||
1.一種構建能分泌表達細胞因子的轉基因飼養層細胞的方法，其特征在于，將編碼至少一種特定細胞因子的基因整合至哺乳動物飼養層細胞的基因組中，隨飼養層細胞進行分泌表達。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述特定細胞因子包含白血病抑制因子或成纖維細胞生長因子。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述哺乳動物飼養層細胞為小鼠胚胎成纖維細胞、豬胚胎成纖維細胞。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，構建含有編碼至少一種特定細胞因子的基因的表達載體，將構建的表達載體通過PB轉座系統整合至哺乳動物飼養層細胞的基因組中，隨飼養層細胞進行分泌表達。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述表達載體中含有啟動子EF-1α或CAG。
6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述表達載體中還含有藥物篩選標記。
7.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：
1）構建PB轉座系統的表達載體；
2）采用電轉化的方式，將構建的表達載體整合至哺乳動物飼養層細胞的基因組中；
3）藥物篩選得到陽性細胞；
4）陽性細胞擴繁，經Co-60照射細胞不再增殖，即得可分泌表達特定細胞因子的飼養層細胞。
8.由權利要求1-7任一項所述方法獲得的可分泌表達特定細胞因子的飼養層細胞。
9.權利要求8所述可分泌表達特定細胞因子的飼養層細胞在干細胞體外培養和分離中的應用。
10.用于檢測權利要求8所述可分泌表達特定細胞因子的飼養層細胞的通用反向引物，其特征在于，所述引物為R：5′-GGGAGGTGTGGGAGGTTTT-3′。
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