技術領域

本發明屬生命科學技術領域，具體涉及一種糖尿病腎病微炎癥小鼠模型的建立方法。

背景技術

糖尿病腎病(diabetic?nephropathy，DN)是一種損毀性腎病，是引起終末期腎病（end?stage?renal?disease,ESRD）發生的主要原因，近10年來患病率逐漸上升，已經超過了50%。糖尿病腎病的特點為腎小球肥大、基底膜增厚、腎小球濾過屏障受損、腎小球基質增生，晚期發生腎小球硬化、腎小管間質纖維化、進展性蛋白尿及腎功能衰竭。然而，糖尿病腎病的具體發生機制尚不完全清楚，近年來研究表明許多因素涉及DN的發生機制，包括蛋白尿、遺傳、種族、缺氧、缺血以及炎癥。其中，炎癥被認為是在DN發生發展中的一個關鍵路徑，DN中存在的代謝、生化及血液動力學紊亂都可以激活炎癥的產生。研究表明，各種炎癥細胞，包括白細胞、單核細胞和巨噬細胞，以及其它一些分子，如細胞因子[單核細胞趨化蛋白-1(monocyte?chemoattractant?protein-1,MCP-1)]、黏附分子[細胞間黏附分子-1(intercellular?adhesion?molecule-1，ICAM-1)]、各種酶（環氧化酶-2、氮氧化物）、生長因子（血管內皮生長因子、生長激素、IGF、TGF-β）及核因子(NF-Κ?B)都參與了糖尿病腎病的發展過程。炎癥通路中的這些信號分子活化并募集成纖維細胞，參與腎臟纖維化過程。因此，除了常規的控制血糖和血壓外，進一步研究炎癥通路活化及其引起腎損傷的機制，找出阻斷這些信號的方法，將是一種新的能有效控制糖尿病腎病的治療手段。

目前尚未發現有關糖尿病腎病的微炎癥研究模型。

發明內容

本發明的目的在于提供一種糖尿病腎病微炎癥小鼠模型的建立方法，有助于深入了解糖尿病腎病損傷機制，更好地防治糖尿病腎病的發生發展。

本發明采用以下技術方案：

一種糖尿病腎病微炎癥小鼠模型的建立方法，包括以下步驟：

步驟1、挑選6-8周齡雄性db/db小鼠，飼養備用；

步驟2、將步驟1選擇的每只小鼠每日或隔日背部皮下注射質量濃度為5～10%的酪蛋白（casein）溶液0.3～0.8ml，持續8-12周,以刺激產生慢性持續微炎癥反應；

步驟3、將步驟2得到的小鼠進行臨床生化指標和組織病理學分析，即可獲得糖尿病腎病微炎癥小鼠模型。

進一步地，步驟1所述小鼠為8周齡雄性db/db小鼠。

進一步地，所述步驟2中casein溶液注射持續時間為8周。

進一步地，步驟3中所述臨床生化指標和組織病理學分析包括采取ELISA法檢測炎癥指標，Lowery法測24小時尿蛋白，免疫組化檢查腎臟組織炎癥因子的表達，光鏡檢查小鼠腎臟病理變化。

本發明的有益效果：本發明首次應用db/db小鼠并結合小劑量casein皮下注射成功誘導具有典型微炎癥特征的糖尿病腎病模型，具有操作簡單、經濟實用、造模成功率高等特點，而且能模仿人類糖尿病疾病特征，具備微炎癥、高血糖、腎小球系膜基質增生、腎小球硬化等特點，病理學檢查符合糖尿病腎病病理變化，該模型為研究糖尿病腎病的發生及發展機制打下基礎。

附圖說明

圖1為本發明模型建立方法流程圖；

圖2為實施例1模型組和對照組造模8周后小鼠血清中SAA濃度，其中*表示P<0.01VS對照組；

圖3為實施例1模型組和對照組造模8周后小鼠血清中TNF-α濃度，其中*表示P<0.01VS對照組；

圖4為實施例1模型組和對照組造模8周小鼠24小時尿蛋白變化情況圖；

圖5為實施例1對照組造模8周后HE染色小鼠腎臟組織光鏡病理變化圖（×400）；

圖6為實施例1模型組造模8周后HE染色小鼠腎臟組織光鏡病理變化圖（×400）；

圖7為實施例1對照組造模8周后PAS染色小鼠腎臟組織光鏡病理變化圖（×400）；

圖8為實施例1模型組造模8周后PAS染色小鼠腎臟組織光鏡病理變化圖（×400）；

圖9為實施例1對照組造模8周后小鼠腎臟組織MCP-1表達圖（×400）；

圖10為實施例1模型組造模8周后小鼠腎臟組織MCP-1表達圖（×400）；

圖11為實施例1對照組造模8周后小鼠腎臟組織TNF-α表達圖（×400）；

圖12為實施例1模型組造模8周后小鼠腎臟組織TNF-α表達圖（×400）。

具體實施方式：