技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種口腔粘膜上皮細(xì)胞仿真三維培養(yǎng)器及培養(yǎng)方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

口腔粘膜上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)具有重要的生物學(xué)及臨床意義。它不僅為研究口腔粘膜分化、口腔病理生理、毒理學(xué)及癌發(fā)生機(jī)理等提供良好的實(shí)驗(yàn)體系，也對(duì)人類組織工程化口腔粘膜構(gòu)建和口腔粘膜組織缺損修復(fù)具有重要意義，同時(shí)對(duì)于眼瞼、喉、氣管及尿道等粘膜缺損的修復(fù)重建有重要臨床意義。

細(xì)胞的發(fā)育和功能都依賴于細(xì)胞微環(huán)境中分子間的相互作用。傳統(tǒng)的二維細(xì)胞培養(yǎng)是較為普遍的細(xì)胞培養(yǎng)手段，并不是細(xì)胞生長的自然狀態(tài)，因而細(xì)胞在基因表達(dá)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和形態(tài)學(xué)方面都可能與天然狀態(tài)存在差異。三維細(xì)胞培養(yǎng)是介于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與二維平板細(xì)胞培養(yǎng)之間的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，將三維載體與細(xì)胞在體外共培養(yǎng)，使細(xì)胞在載體的立體空間結(jié)構(gòu)中遷移、生長，構(gòu)成三維的細(xì)胞載體復(fù)合物。三維培養(yǎng)體系為細(xì)胞提供類似體內(nèi)生長環(huán)境的支架或基質(zhì)，細(xì)胞通過緊密連接和（或）縫隙連接等方式建立細(xì)胞間及細(xì)胞與基質(zhì)間的聯(lián)系，形成一定的三維結(jié)構(gòu)；三維細(xì)胞培養(yǎng)在基因表達(dá)、基質(zhì)分泌及細(xì)胞功能活動(dòng)等方面與二維培養(yǎng)均有明顯差異，與體內(nèi)細(xì)胞生長環(huán)境更為相似。因此，三維細(xì)胞培養(yǎng)可以更真實(shí)地模擬體內(nèi)細(xì)胞生長的三維微環(huán)境，細(xì)胞在三維條件下的響應(yīng)更能代表其在體內(nèi)條件下的響應(yīng)，又能體現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)的直觀性及條件可控制性。

目前，三維培養(yǎng)技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于多種腫瘤細(xì)胞和干細(xì)胞等的體外培養(yǎng)模型中，但是未見口腔粘膜上皮細(xì)胞的三維培養(yǎng)器及培養(yǎng)方法的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于根據(jù)現(xiàn)有的口腔粘膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中存在的不足，提供一種口腔粘膜上皮細(xì)胞仿真三維培養(yǎng)器，以高度接近模擬人體口腔粘膜的生理環(huán)境；

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種使用上述口腔粘膜上皮細(xì)胞仿真三維培養(yǎng)器的培養(yǎng)方法；

本發(fā)明還有一個(gè)目的在于提供上述口腔粘膜上皮細(xì)胞仿真三維培養(yǎng)器的應(yīng)用。

?為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明所采取的方案為：一種口腔粘膜上皮細(xì)胞仿真三維培養(yǎng)器，其包括單個(gè)或多個(gè)基本結(jié)構(gòu)單元，所述基本結(jié)構(gòu)單元由緊密嵌套的內(nèi)容器和外容器組成，所述內(nèi)容器和外容器由用于細(xì)胞培養(yǎng)的有機(jī)材料制成；內(nèi)容器的底部由滲透支持膜構(gòu)成且與外容器的底部具有一定間隙。

進(jìn)一步優(yōu)選的方案，所述內(nèi)容器和外容器呈圓柱狀。

進(jìn)一步優(yōu)選的方案，所述滲透支持膜由用于細(xì)胞培養(yǎng)的有機(jī)材料制成，滲透支持膜上設(shè)有密集小孔，用于培養(yǎng)液或其它成分通過；小孔直徑遠(yuǎn)小于細(xì)胞直徑。

另外，本發(fā)明提供一種口腔粘膜上皮細(xì)胞仿真三維培養(yǎng)器的培養(yǎng)方法，其包括以下步驟：

血管內(nèi)皮細(xì)胞接種于內(nèi)容器的滲透支持膜上形成血管內(nèi)皮細(xì)胞層；間質(zhì)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)混合放置于滲透支持膜血管內(nèi)皮細(xì)胞層上方；于混合體的上方接種口腔粘膜上皮細(xì)胞；新鮮培養(yǎng)液或含有某種濃度藥物的新鮮培養(yǎng)液加在外容器中，透過血管內(nèi)皮細(xì)胞層進(jìn)入細(xì)胞外間質(zhì)接觸口腔粘膜上皮細(xì)胞，向口腔粘膜上皮細(xì)胞提供營養(yǎng)成分或藥物。

進(jìn)一步優(yōu)選的方案，所述間質(zhì)細(xì)胞包括纖維細(xì)胞及免疫細(xì)胞。

進(jìn)一步優(yōu)選的方案，根據(jù)培養(yǎng)時(shí)間的長短，決定加入培養(yǎng)液的量，并且定期更換培養(yǎng)液。

本發(fā)明替代的方案，作用藥物也能從上方直接加入作用于口腔粘膜上皮細(xì)胞，以模擬人體口腔粘膜直接給藥方式。

還有，本發(fā)明提供一種所述口腔粘膜上皮細(xì)胞仿真三維培養(yǎng)器及培養(yǎng)方法在口腔粘膜的生理、藥理、毒理學(xué)及微生態(tài)研究中的應(yīng)用。

還有，本發(fā)明提供一種所述口腔粘膜上皮細(xì)胞仿真三維培養(yǎng)器及培養(yǎng)方法在人類組織工程化口腔粘膜構(gòu)建和粘膜缺損的修復(fù)重建中的應(yīng)用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明考慮了口腔粘膜上皮細(xì)胞的營養(yǎng)供應(yīng)、血管及血管內(nèi)皮細(xì)胞的因素，接近于人體口腔粘膜的生長環(huán)境，使研究更接近臨床實(shí)際。

附圖說明

圖1?為口腔粘膜上皮細(xì)胞仿真三維培養(yǎng)器的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2?為內(nèi)容器的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖3?為外容器的結(jié)構(gòu)示意圖。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合實(shí)施例來進(jìn)一步解釋本發(fā)明，但實(shí)施例并不對(duì)本發(fā)明做任何形式的限定。

?如圖1至圖3所示，一種口腔粘膜上皮細(xì)胞仿真三維培養(yǎng)器，其包括單個(gè)或多個(gè)基本結(jié)構(gòu)單元，所述基本結(jié)構(gòu)單元由緊密嵌套的內(nèi)容器1和外容器2組成，所述內(nèi)容器1和外容器2由用于細(xì)胞培養(yǎng)的有機(jī)材料制成；內(nèi)容器1的底部由滲透支持膜3構(gòu)成且與外容器2的底部具有一定間隙。本裝置可由單個(gè)內(nèi)容器、外容器構(gòu)成或由一系列成縱橫組列的內(nèi)容器、外容器構(gòu)成。