技術領域

本發明涉及一種中藥制藥領域，具體涉及蟬蛻蛋白酶酶解物及其應用。

背景技術

蟬蛻為蟬科昆蟲黑蚱 Cryptotympana pustulata Fabricius 的若蟲羽化時脫落的皮殼。性甘，味寒，歸肺、肝經。具有疏散風熱，利咽，透疹，明目退翳，解痙的作用，臨床主要用于風熱感冒，咽痛音啞，麻疹不透，風疹瘙癢，目赤翳障，驚風抽搐，破傷風等。主要成分為甲殼質及蛋白質、氨基酸等，藥材中活性成分尚不清楚，因此目前多以全粉末入藥，存在著劑量大，易造成微生物污染等弊病。鑒于動物類蛋白質、粘多糖等大分子物質只有到達胃腸道后受消化酶、酸、堿等作用，方可被酶解或者水解成小分子的肽、低聚糖和其他小分子物質，吸收入血而發生藥效，故生物酶仿生提取方法模擬體內消化過程，提取的有效成分治療效果更佳。

發明內容

本發明目的是提供一種抗凝血和溶栓的蟬蛻蛋白酶酶解物及其應用。

本發明的技術內容：

蟬蛻蛋白酶酶解物，由以下方法制備：

A、凈選蟬蛻，粉碎成細粉；

B、將蟬蛻細粉置于人工胃液中，然后加入胃蛋白酶水解，得到胃蛋白酶酶解液，離心，所得上清液和殘渣備用；

C、取上清液，干燥，得到蟬蛻胃蛋白酶酶解物；

D、取殘渣轉入人工腸液中，加入胰蛋白酶水解，得到蟬蛻胰蛋白酶酶解物；

步驟C所得胃蛋白酶酶解物與步驟D所得胰蛋白酶酶解物即為蟬蛻蛋白酶酶解物。

蟬蛻蛋白酶酶解物，由以下方法制備：

A、凈選蟬蛻，粉碎成細粉；

B、將蟬蛻細粉置于人工胃液中，密閉，于37℃恒溫水浴30分鐘后，加入3%胃蛋白酶水解3小時，得到胃蛋白酶酶解液，將胃蛋白酶酶解液置于85℃恒溫水浴15分鐘，冷卻至室溫，以4500r/min離心15分鐘，所得上清液和殘渣備用；

C、取上清液，干燥，得蟬蛻胃蛋白酶酶解物；

D、取殘渣加入人工腸液，密閉，于45℃恒溫水浴30分鐘后，加入5%胰蛋白酶水解4小時，將酶解液于85℃恒溫水浴15分鐘，冷卻至室溫，以4500r/min離心15分鐘，取上清液，干燥，得蟬蛻胰蛋白酶酶解物；

步驟C所得胃蛋白酶酶解物與步驟D所得胰蛋白酶酶解物即為蟬蛻蛋白酶酶解物。

蟬蛻蛋白酶酶解物，由以下方法制備：

A、凈選蟬蛻，粉碎成細粉；

B、將蟬蛻細粉置于人工胃液中，蟬蛻細粉與人工胃液的重量體積比為1:20，密閉，于37℃恒溫水浴30分鐘后，加入3%胃蛋白酶水解3小時，得到胃蛋白酶酶解液，將胃蛋白酶酶解液置于85℃恒溫水浴15分鐘，冷卻至室溫，以4500r/min離心15分鐘，所得上清液和殘渣備用；

C、取上清液，干燥，得蟬蛻胃蛋白酶酶解物；

D、取殘渣加入20倍量人工腸液，密閉，于45℃恒溫水浴30分鐘后，加入5%胰蛋白酶水解4小時，將酶解液于85℃恒溫水浴15分鐘，冷卻至室溫，以4500r/min離心15分鐘，取上清液，干燥，得蟬蛻胰蛋白酶酶解物；

步驟C所得胃蛋白酶酶解物與步驟D所得胰蛋白酶酶解物即為蟬蛻蛋白酶酶解物。

所述蟬蛻胃蛋白酶酶解物或胰蛋白酶酶解物在制備抗凝血或溶栓的藥物中的應用。

所述藥物的劑型為膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑、口服液或丸劑。

為了驗證蟬蛻蛋白酶酶解物的抗凝血和溶栓作用，做了如下實驗：

蟬蛻胃蛋白酶解產物抗凝血或溶栓活性評價：

本發明采用活化部分凝血酶時間法（APTT法）和纖維蛋白原平板法對活性成分的抗凝血和溶栓效果進行評價，評價方法如下：

1 材料

1.1　藥材

蟬蛻（石家莊以嶺藥業股份有限公司提供），置干燥箱60℃以下干燥，粉碎成細粉，備用。

1.2試劑

牛纖維蛋白原（Sigma F8630，購自北京環亞泰克生物醫學技術有限公司）；胰蛋白酶1：250（Amresco0458，購自北京華美轉導科技有限公司）；胃蛋白酶1：10000（Sigma P7000，購自北京環亞泰克生物醫學技術有限公司）；醫用注射性尿激酶（購自北京市望京醫院）；凝血酶（Sigma T4648，購自北京環亞泰克生物醫學技術有限公司）；活化部分凝血酶時間（APTT）試劑10*1.5ml（購自上海太陽生物試劑公司）；三氯乙酸（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）；乙醇（分析純）。