技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種豬鏈球菌胞壁水解酶、其編碼基因和應用。

技術背景

豬鏈球菌是一種重要的人獸共患病病原，可以引起腦膜炎、關節炎、心內膜炎、敗血癥、肺炎、休克和突然死亡等。該菌按莢膜多糖抗原差異可分為33個血清型，其中2型(SS2)是流行最廣，致病性最強，豬群攜帶率較高的病原，給養豬業造成巨大經濟損失，對公共衛生尤其是從業人員的生命安全亦構成嚴重威脅。荷蘭、英國、美國、加拿大、澳大利亞、新西蘭、比利時、巴西、丹麥、挪威、芬蘭、西班牙、德國、愛爾蘭、日本、中國臺灣及大陸等先后報道了該病。

豬鏈球菌病2型感染后一般采取抗生素治療，但近年來抗生素的濫用，使豬鏈球菌2型產生了嚴重的耐藥性，給該病的防控帶來困難。

發明內容

本發明的目的是提供一種豬鏈球菌胞壁水解酶，能夠有效殺滅豬鏈球菌。

本發明的另一目的是提供豬鏈球菌胞壁水解酶的基因。

本發明的再一目的是提供豬鏈球菌胞壁水解酶在殺滅豬鏈球菌方面的應用。

本發明的目的采用如下技術方案實現：

一種豬鏈球菌胞壁水解酶，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。

編碼所述豬鏈球菌胞壁水解酶的基因。所述基因的序列如SEQ?ID?NO：2所示。可以理解的是，由于氨基酸密碼子的簡并性，本發明中編碼豬鏈球菌胞壁水解酶的基因除了SEQ?ID?NO.2所示的序列，還包括編碼上述氨基酸序列的其他核酸分子。

含有豬鏈球菌胞壁水解酶的基因的重組表達載體。所述豬鏈球菌胞壁水解酶的基因序列可以為SEQ?ID?NO.2所示。所述重組表達載體是將豬鏈球菌胞壁水解酶的基因插入pET-32a（＋）的EcoR?I和Xho?I酶切位點之間。

含有豬鏈球菌胞壁水解酶的基因的重組菌。所述豬鏈球菌胞壁水解酶的基因序列可以為SEQ?ID?NO.2所示。

一種制備豬鏈球菌胞壁水解酶的方法，通過培養所述重組菌并進行純化后得到所述豬鏈球菌胞壁水解酶。

所述豬鏈球菌胞壁水解酶在殺滅豬鏈球菌方面的應用。

本發明的有益效果：

本發明提供的豬鏈球菌胞壁水解酶，能夠有效殺滅豬鏈球菌，大腸桿菌、金黃色葡萄球菌及嗜水氣單胞桿菌。

本發明豬鏈球菌胞壁水解酶的基因可以在重組大腸桿菌中高效表達，所得豬鏈球菌胞壁水解酶活性和穩定性高，能夠有效殺滅豬鏈球菌，大腸桿菌、金黃色葡萄球菌及嗜水氣單胞桿菌。

采用本發明重組菌進行制備豬鏈球菌胞壁水解酶，方法簡單，成本低廉。

附圖說明

圖1為重組表達蛋白的SDS-PAGE電泳圖，其中：1、對照菌的菌體裂解液；2、無IPTG誘導培養的BL21-pET32a-LytA的菌體裂解液；3-6、IPTG誘導培養的BL21-pET32a-LytA的菌體裂解液,誘導時間分別為2h、3h、4h和5h；7、純化后的重組表達蛋白；M、蛋白分子marker。

圖2為驗證重組表達蛋白胞壁水解酶活性的酶譜實驗圖，其中：1、純化的重組表達蛋白；2、對照菌裂解液；M、蛋白分子marker。

圖3為重組表達蛋白的Western-blotting分析電泳圖，其中：1、對照菌的菌體裂解液；2、純化后的重組表達蛋白；M、蛋白分子marker。

圖4是重組表達蛋白對豬鏈球菌2型HA9801株的平板溶菌試驗照片，其中紙片1上滴加的是純化的重組表達蛋白，紙片2上滴加的是經IPTG誘導培養的含空載體pET32a的BL21裂解液，紙片3上滴加的是PBS緩沖液。

圖5是重組表達蛋白對豬鏈球菌2型ZY05719株的平板溶菌試驗照片，其中紙片1上滴加的是純化的重組表達蛋白，紙片2上滴加的是經IPTG誘導培養的含空載體pET32a的BL21裂解液，紙片3上滴加的是PBS緩沖液。

圖6是重組表達蛋白對豬鏈球菌2型T15株的平板溶菌試驗照片，其中紙片1上滴加的是純化的重組表達蛋白，紙片2上滴加的是經IPTG誘導培養的含空載體pET32a的BL21裂解液，紙片3上滴加的是PBS緩沖液。

具體實施方式

下面對本發明的實施例作詳細說明，本實施例在以本發明技術方案為前提下進行實施，給出了詳細的實施方式和具體的操作過程，未注明具體條件的實驗方法、工作原理，通常按照常規條件進行。本發明的保護范圍不先于下述的實施例。