一、技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明是一種涉及豬胸膜肺炎放線桿菌內(nèi)毒素（ApxIV）抗體的檢測(cè)試劑顯示器具，特別是涉及一種可檢測(cè)豬胸膜肺炎放線桿菌內(nèi)毒素（ApxIV）抗體的檢測(cè)試紙條。

二、技術(shù)背景

豬胸膜肺炎是由豬胸膜肺炎放線桿菌(APP)引起的豬的一種急性、熱性、高度傳染性的呼吸道疾病。豬胸膜肺炎放線桿菌為巴氏桿菌科放線桿菌屬的成員，是一種革蘭氏染色陰性小球桿菌，有的呈纖細(xì)桿狀或絲狀，表現(xiàn)為多形態(tài)性和兩極著色性。有莢膜，有菌毛，無芽孢。臨床上以急性出血性纖維素性胸膜肺炎和慢性纖維素性壞死性胸膜肺炎為特征。本病分布于世界許多國(guó)家和地區(qū)，是一種世界性疾病，目前呈上升的流行趨勢(shì)。我國(guó)于1987年證實(shí)存在本病，給規(guī)模化養(yǎng)豬場(chǎng)造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。天氣的變化和秋冬季節(jié)的來臨易導(dǎo)致本病的發(fā)生與流行，應(yīng)引起高度重視，采取有力措施，避免寒冷季節(jié)本病的發(fā)生與流行。

病豬、隱性感染的帶菌豬是本病的主要傳染源，特別是亞臨床感染的母豬是病原的主要貯存宿主，在本菌的傳播中起重要作用。本病雖然不會(huì)通過垂直傳播感染仔豬，但可通過直接接觸經(jīng)呼吸道傳染，影響到仔豬的安全。通過空氣傳播，可從一個(gè)發(fā)病豬舍跳躍式傳給另一個(gè)豬舍。也可以通過接觸被病原污染的車輛、工具、器械以及飼養(yǎng)人員流動(dòng)等間接傳播。嚙齒類動(dòng)物和鳥類也可傳播本病。各種年齡、性別的豬只都有易感性，其中以6～16周齡的豬發(fā)病較多，以3月齡的豬發(fā)病率最高，可達(dá)80％～100％，死亡率一般為50％。

豬胸膜肺炎是當(dāng)前危害世界各國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的主要疾病之一。目前APP共發(fā)現(xiàn)有15種血清型，并且各個(gè)國(guó)家流行的優(yōu)勢(shì)血清型各不相同。不同血清型之間及同一血清型的不同菌株的毒力均存在差異，致病性也有強(qiáng)弱之分，從而導(dǎo)致該病的診斷和治療非常困難。近幾年來的研究表明，與病原菌毒力相關(guān)的因子有毒素、莢膜、外膜蛋白、脲酶等，其中毒素既是主要的毒力因子，也是主要的免疫原，可作為診斷抗原建立血清學(xué)檢測(cè)方法，還可以用于診斷和衡量免疫狀態(tài)，因此毒素研究已成為該病的研究熱點(diǎn)。APP共有4種毒素，即毒素????????????????????????????????????????????????、Ⅱ、?以及最近發(fā)現(xiàn)的毒素Ⅳ，它們均屬于RTX?(Repeatsinthe?structural，RTX)毒素家族。近年發(fā)現(xiàn)，沒有一種血清型的APP能同時(shí)分泌4種毒素，但APP所有血清型在感染動(dòng)物體內(nèi)都能分泌ApxlV毒素蛋白，而體外培養(yǎng)的細(xì)菌卻不能分泌該毒素。因此，在動(dòng)物體內(nèi)檢測(cè)到ApxlV毒素，就能證明APP的感染，ApxlV毒素蛋白在建立診斷方法方面具較大的理論價(jià)值和應(yīng)用前景，可用于區(qū)別診斷APP的感染與非感染。目前對(duì)上述疾病及抗體的檢測(cè)方法主要有以下幾種。

(1)?顯微鏡檢。取鼻腔與支氣管的分泌物或肺部病變材料涂片，革蘭氏染色，顯微鏡檢查，如見到多形態(tài)的兩極濃染的革蘭氏陰性的小球桿菌或纖細(xì)桿菌，可作進(jìn)一步鑒定。

(2)病原分離鑒定。無菌取病料，用5％綿羊血液瓊脂平板與金黃色葡萄球菌交叉劃線接種，在5％～10％二氧化碳濃度條件下37℃培養(yǎng)24小時(shí)，在金黃色葡萄球菌周圍有衛(wèi)星菌落，再進(jìn)行脲酶及甘露糖發(fā)酵等生化鑒定。并進(jìn)行環(huán)磷酸腺苷(CAMP)試驗(yàn)、溶血性測(cè)定以及血清型等檢查。

(3)血清學(xué)診斷。熒光抗體技術(shù)可用于特異抗原或抗體的檢查；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)與補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)可用于檢測(cè)抗體，查出隱性感染的豬只。間接血凝試驗(yàn)(IHA)，APP的間接血凝試驗(yàn)用于APP的檢測(cè)與分型。乳膠凝集試驗(yàn)是一種簡(jiǎn)便快速的檢測(cè)方法，它既可以用于APP的診斷，也可用于APP抗體檢測(cè)。以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)技術(shù)進(jìn)行APP和抗體的血清學(xué)診斷，可以分為型特異性ELISA?和種特異性ELISA。前者是只能對(duì)一種血清型的APP做出檢測(cè)，后者是對(duì)所有血清型的APP都可做出檢測(cè)。

上述檢測(cè)方法需要專業(yè)人員在實(shí)驗(yàn)室操作，操作繁瑣，檢測(cè)費(fèi)時(shí)費(fèi)力；而且需要昂貴的儀器設(shè)備，如酶標(biāo)儀等，對(duì)非專業(yè)人員而言，上述檢測(cè)方法很難完成。雖然上述方法特異敏感，但無法實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)或診斷。本發(fā)明，研究一種簡(jiǎn)便快速、實(shí)時(shí)在線檢測(cè)試紙，對(duì)控制和消滅此疾病意義重大。

三、發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中檢測(cè)豬胸膜肺炎放線桿菌內(nèi)毒素ApxIV抗體存在的缺點(diǎn)，提供一種特異、敏感、簡(jiǎn)便快速檢測(cè)豬胸膜肺炎放線桿菌內(nèi)毒素抗體的方法，研制出檢測(cè)豬胸膜肺炎放線桿菌內(nèi)毒素ApxIV抗體的檢測(cè)試紙條。