技術領域

本發明涉及一種鴨坦布蘇病毒活疫苗及其制備方法，屬于獸用生物制品技術領域。?

背景技術

2010年4月以來，我國主要蛋鴨養殖區福建、山東、浙江、上海、江蘇等地陸續暴發一種以蛋鴨、種鴨產蛋驟然大幅下降為主要臨床特征、以出血性卵巢炎為主要病變特征的急性傳染病。在疫病流行初期，根據主要病變和臨床特點，將該流行性疾病稱為鴨出血性卵巢炎（Duck?Hemorrhagic?Ovaritis，DHO)。隨著病原學研究的深入，該病被確診是由一種新型黃病毒——鴨坦布蘇病毒（DuckTembusuvirus，DTMUV）引起。2011年中國畜牧獸醫學會第一屆水禽疫病防控研討會將該病名稱統一為“鴨坦布蘇病毒病”。我們從某大型鴨場的發病種鴨群中分離到一株病毒，經初步鑒定該病毒為有囊膜的RNA病毒。RT-PCR擴增測序顯示該病毒與黃病毒科黃病毒屬的坦布蘇病毒親緣關系最近，隨將該病毒稱為鴨坦布蘇病毒WFG36株。?

由于對該新型流行疾病無特效治療方法，疫苗的研制開發是控制該疾病的首選措施。?

目前已有滅活疫苗的研究報道，此前，申請人已經于2011年8月31日提交了滅活疫苗的發明專利申請，申請號為201110254517.X。但在實際應用中，活疫苗相比滅活疫苗有著產生抗體快、副反應小等優勢，目前，申請人通過人工馴化，獲得了鴨坦布蘇病毒的弱毒株，可用于制備鴨坦布蘇病毒活疫苗的制備。申請人將鴨坦布蘇病毒WFG36株，在CEF細胞（雞胚成纖維細胞）上經人工連續傳代培養，病毒對實驗鴨的致病力顯著降低，并保持了良好的免疫原性和遺傳穩定性，命名為“鴨坦布蘇病毒WF100株”。?

發明內容

本發明的目的在于利用本發明人自行分離、鑒定、保存的一株鴨坦布蘇病毒WFG36株，在CEF細胞上連續傳代致弱而篩選出具有良好免疫保護率的弱毒疫苗株WF100株，用該弱毒疫苗株所制備的疫苗對目前中國流行鴨坦布蘇病毒的攻擊提供良好免疫保護效力。?

本發明技術方案?

1..本發明所涉及的鴨坦布蘇病毒活疫苗，含有經人工致弱的鴨坦布蘇病毒（Duck?Tembusu?virus）病毒株WF100株，該病毒株已于2013年02月22日送交北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保?藏，保藏號為CGMCCNo.7306。?

2.鴨坦布蘇病毒活疫苗的制備方法是將鴨坦布蘇病毒WF100株接種生長良好的CEF細胞、VERO細胞和BHK21細胞中任一種細胞單層繁殖，連續觀察72～96小時，當細胞病變達80%左右時，收獲感染的細胞病毒液，加入凍干保護劑，經真空冷凍干燥，制備成鴨坦布蘇病毒活疫苗。?

3.一種鴨坦布蘇病毒活疫苗的應用是給鴨接種有效劑量的一種鴨坦布蘇病毒活疫苗能使接種鴨獲得對鴨坦布蘇病毒產生有效預防的免疫力。?

具體實施方式

1.疫苗生產用弱毒株的培育?

使用9～10日齡活力良好的SPF雞胚制備CEF細胞，待細胞長成單層后，用鴨坦布蘇病毒（DTMUV）WFG36強毒株按照5%接種量接種細胞，觀察細胞病變情況，72～96小時后，無菌收集細胞懸液，進行下一次傳代。連續傳至100代，進行致弱評價試驗，如下：?

將WFG36株P40、P60、P80、P100代毒分別接種230日齡左右產蛋鴨（產蛋率85%～90%），每只肌肉注射1ml，并設置生理鹽水對照組。自接種之日起，每日觀察、記錄接種鴨群的發病情況、采食量和產蛋量。?