技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種豬瘟分支肽及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

豬瘟病毒E2蛋白可以誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體，是豬瘟病毒最主要的保護(hù)性抗原(Konig等，J?Virol，1995，69：479-86)。關(guān)于E2蛋白抗原表位的鑒定已經(jīng)取得了一定的進(jìn)展。其中，E2蛋白的829-837位氨基酸是一個(gè)主要的抗原表位，而且是保守的豬瘟特異性的線性表位(Lin等，J?Virol，2000，74：11619-25)。大腸桿菌表達(dá)的該表位與GST的融合產(chǎn)物誘導(dǎo)了保護(hù)性免疫應(yīng)答(Liu等，J?Virol?Meth，2006，134：125-9)，并且串聯(lián)了4個(gè)拷貝后，表達(dá)的融合蛋白能抵抗豬瘟病毒的攻擊(Liu等，Vaccine，2006，24：7175-7180)。把該表位人工合成的肽鏈與BSA偶聯(lián)后，免疫豬，僅僅顯示了微弱的保護(hù)效力(Dong等，Vaccine，2006，24：1906-1913)。利用合成重疊肽的方法，已經(jīng)鑒定出了一系列的豬瘟E2蛋白的線性中和表位，把上述表位分別與BSA偶聯(lián)后，免疫豬，能誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體，但并不能對豬提供完全的保護(hù)(Dong等，Vaccine，2006，24：1906-1913；Dong等，Vaccine，2006，24：426-434)。上述研究無論是表位與GST融合表達(dá)還是合成的肽鏈與BSA偶聯(lián)，免疫動物后都不可避免地產(chǎn)生針對載體的免疫應(yīng)答，這可能會給免疫動物帶來一定的風(fēng)險(xiǎn)。而且，短肽鏈與巨大的載體偶聯(lián)會更多地誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對載體的免疫應(yīng)答(cease等，Proc?Natl?Acad?Sci?U?S?A，1987，84(12)：4249-53)。因此，需要研制一種包含上述E2蛋白抗原表位的免疫原分子，能為豬提供安全、高效的免疫保護(hù)。

對于豬瘟病毒抗體的檢測，目前公認(rèn)的方法是用中和試驗(yàn)來檢測，但是該方法操作復(fù)雜，費(fèi)時(shí)，而且需要高質(zhì)量的豬瘟單克隆抗體來檢測，普通的實(shí)驗(yàn)室很難達(dá)到上述要求。因此，豬瘟抗體的檢測需要一種制備簡單、可實(shí)現(xiàn)快速檢測的檢測抗原。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種豬瘟分支肽，該分支肽含有輔助性T細(xì)胞表位和具有中和活性的豬瘟病毒E2蛋白B細(xì)胞表位，該分支肽既可以作為免疫原誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，又可以作為檢測抗原來檢測豬瘟病毒抗體，其作為免疫原時(shí)，不僅可避免載體蛋白誘導(dǎo)不期望的免疫應(yīng)答，而且能提高肽疫苗的免疫原性，增強(qiáng)免疫保護(hù)作用。

此外，還需要提供一種豬瘟分支肽在制備預(yù)防或治療豬瘟病的藥物中的應(yīng)用，以及還提供一種豬瘟分支肽在制備檢測豬瘟病毒抗體的生物制品中的應(yīng)用。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

在本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種豬瘟分支肽，該分支肽具有B-L-T結(jié)構(gòu)，其中，

T為通用型輔助性T細(xì)胞表位，該通用型輔助性T細(xì)胞表位的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1所示；

B為豬瘟病毒E2蛋白B細(xì)胞表位，該B細(xì)胞表位的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示；

L為連接T與B的連接肽，該連接肽具有下述結(jié)構(gòu)式：

其中，K代表賴氨酸，C代表半胱氨酸，所述B細(xì)胞表位連接在該連接肽的分支結(jié)構(gòu)上。

本發(fā)明的豬瘟分支肽，通過提高B細(xì)胞表位的密度以及模擬表位的空間構(gòu)象從而提高合成肽的免疫原性。通用型輔助性T細(xì)胞表位克服了不同種類動物和不同個(gè)體的MHC限制，能誘導(dǎo)更有效的免疫應(yīng)答。

為了增加本發(fā)明豬瘟分支肽的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，在肽鏈的氨基端(即B細(xì)胞表位的游離末端)可以進(jìn)行乙酰化修飾，在肽鏈的羧基端(即通用型輔助性T細(xì)胞表位的游離末端)可以進(jìn)行酰胺化修飾。

本發(fā)明的另一方面，提供了一種疫苗組合物，用于免疫動物以對抗豬瘟病毒的感染，所述疫苗組合物包含：上述豬瘟分支肽、以及佐劑。

用本領(lǐng)域已知的常規(guī)方法人工合成上述豬瘟分支肽疫苗，純度在90％以上，將豬瘟分支肽用無菌的PBS稀釋成濃度為1微克每微升的肽溶液，以等量的蛋白質(zhì)佐劑(如弗氏佐劑等)與肽溶液混合，乳化成疫苗組合物，既可作為免疫原用于免疫動物。

在本發(fā)明的另一方面，還提供了上述豬瘟分支肽在制備預(yù)防或治療豬瘟病的藥物中的應(yīng)用。所述藥物包括豬瘟疫苗。

本發(fā)明的另一方面，還提供了一種檢測豬瘟病毒抗體的試劑盒，包含上述豬瘟分支肽。

所述試劑盒還包含豬瘟病毒陽性對照血清、豬瘟病毒陰性對照血清。

所述試劑盒還包含ELISA酶標(biāo)板、酶標(biāo)二抗、顯色液。