技術(shù)領(lǐng)域

本實(shí)用新型涉及一種用于在診斷現(xiàn)場(chǎng)正確、簡(jiǎn)便且迅速地對(duì)待測(cè)試樣中的糖化血紅蛋白含量進(jìn)行比色定量的多層試驗(yàn)片。?

背景技術(shù)

測(cè)量糖化蛋白質(zhì)在進(jìn)行糖尿病的診斷、預(yù)防以及治療方面非常重要。糖化蛋白質(zhì)通過在生物體內(nèi)葡萄糖與血中蛋白質(zhì)的氨基（主要是末端氨基酸的α-氨基、賴氨酸殘基的γ-氨基）發(fā)生非酶促反應(yīng)而生成。由于蛋白質(zhì)糖化的程度直接與血中葡萄糖濃度（以下稱為血糖值）成比例，因此，例如，糖化血紅蛋白的情況下，通過測(cè)量糖化蛋白質(zhì)可以掌握約2～3個(gè)月內(nèi)的血糖控制狀態(tài)，糖化白蛋白的情況下，通過測(cè)量糖化蛋白質(zhì)可以掌握約2～3周內(nèi)的血糖控制狀態(tài)。?

尤其是作為糖化血紅蛋白的一種的血紅蛋白A1c在糖尿病的診斷時(shí)被認(rèn)為是最重要的。?

作為上述糖化蛋白質(zhì)的測(cè)量方法，已知有高效液相色譜（HPLC）法、免疫法以及酶法等。在現(xiàn)有技術(shù)中，高效液相色譜（HPLC）法以及免疫法占據(jù)大部分，但是近年來由于酶法可以迅速、大量、正確且廉價(jià)地對(duì)大量樣本進(jìn)行測(cè)量，因此也開始被頻繁采用。?

有關(guān)酶法，例如已知有通過以下的工序?qū)μ腔鞍踪|(zhì)進(jìn)行比色定量的技術(shù)（例如，參照專利文獻(xiàn)1～4）。?

（1）使待測(cè)試樣中的紅細(xì)胞溶血以提取出糖化血紅蛋白的工序。?

（2）使上述糖化血紅蛋白與蛋白酶反應(yīng)從而從糖化血紅蛋白的糖化的β鏈N末端切出糖化氨基酸和/或糖化肽的工序。?

（3）使上述糖化氨基酸和/或糖化肽與糖化氨基酸氧化酶反應(yīng)從而生成過氧化氫的工序。?

（4）在過氧化物酶的存在下使上述過氧化氫與氧化還原類顯色試劑反應(yīng)而顯色的工序。?

（5）根據(jù)上述顯色對(duì)待測(cè)試樣中的糖化血紅蛋白含量進(jìn)行比色定量的工序。?

但是，所涉及的現(xiàn)有技術(shù)由于受到可能存在于待測(cè)試樣中的、并非來自作為測(cè)量對(duì)象的糖化蛋白質(zhì)的糖化氨基酸和/或糖化肽的影響，存在表觀測(cè)量值增加的問題?

另一方面，為解決上述問題，發(fā)明了測(cè)量糖化蛋白質(zhì)含量的方法（例如專利文獻(xiàn)5～9），該方法的特征在于包括前處理工序，即，在用蛋白酶處理糖化蛋白質(zhì)之前，通過使糖化氨基酸氧化酶作用于上述可能存在于待測(cè)試樣中的、并非來自糖化蛋白質(zhì)的糖化氨基酸和/或糖化肽，從而對(duì)上述糖化氨基酸和/或糖化肽進(jìn)行分解處理。?

但是，所涉及的現(xiàn)有技術(shù)是稀釋待測(cè)試樣、添加液體狀態(tài)的試劑、使之在反應(yīng)容器內(nèi)發(fā)生反應(yīng)后測(cè)量反應(yīng)液的吸光度的方法，以使用生物化學(xué)自動(dòng)分析裝置的方法為主流。但是所述生物化學(xué)自動(dòng)分析裝置存在是大型裝置且價(jià)格昂貴、需要熟練的檢測(cè)技師來操作、從採(cǎi)血到出報(bào)告結(jié)果為止的時(shí)間較長(zhǎng)這些問題，難以適用于POCT（point?of?care?testing（即，臨床現(xiàn)場(chǎng)即時(shí)檢查））。?

現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)?

專利文獻(xiàn)?

專利文獻(xiàn)1：國(guó)際公開第2002-006519號(hào)?

專利文獻(xiàn)2：特開2004-222570號(hào)公報(bào)?

專利文獻(xiàn)3：特開2007-181466號(hào)公報(bào)?

專利文獻(xiàn)4：特開2010-148515號(hào)公報(bào)?

專利文獻(xiàn)5：特開2007-289202號(hào)公報(bào)?

專利文獻(xiàn)6：特開2010-104386號(hào)公報(bào)?

專利文獻(xiàn)7：特開2010-110333號(hào)公報(bào)?

專利文獻(xiàn)8：特開2010-252814號(hào)公報(bào)?

專利文獻(xiàn)9：特開2010-263921號(hào)公報(bào)?

非專利文獻(xiàn)?

非專利文獻(xiàn)1：Clinical?Chemistry43：122390-2396（1997）?

實(shí)用新型內(nèi)容

實(shí)用新型所要解決的技術(shù)問題?

本實(shí)用新型是以有關(guān)現(xiàn)有技術(shù)的技術(shù)問題為背景進(jìn)行的。即，本實(shí)用新型的目的為提供一種用于在診斷現(xiàn)場(chǎng)正確、簡(jiǎn)便且迅速地對(duì)待測(cè)試樣中的糖化血紅蛋白含量進(jìn)行比色定量的多層試驗(yàn)片以及測(cè)量方法。更具體而言，本實(shí)用新型的目的在于提供一種不易受可能存在于待測(cè)試樣中的、并非來自糖化蛋白質(zhì)的糖化氨基酸和/或糖化肽的影響、且保存穩(wěn)定性優(yōu)異的用于對(duì)糖化血紅蛋白含量進(jìn)行比色定量的多層試驗(yàn)片以及測(cè)定方法。?

解決技術(shù)問題的手段?

本申請(qǐng)發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過將糖化氨基酸氧化酶承載在比蛋白酶更靠近待測(cè)試樣點(diǎn)樣面的層上，從而在糖化血紅蛋白被蛋白酶切斷之前，使糖化氨基酸氧化酶作用于可能存在于待測(cè)試樣中的、并非來自糖化蛋白質(zhì)的糖化氨基酸和/或糖化肽，從而能夠?qū)ι鲜鎏腔被岷?或糖化肽進(jìn)行分解處理。?