技術領域

本發明屬于獸醫生物醫藥技術領域，尤其涉及一種傳染性喉氣管炎粘膜疫苗及其制備方法。

背景技術

傳染性喉氣管炎（Infectious?Laryngotracheitis，ILT）是由皰疹病毒科（Herpetoviridae）皰疹病毒屬（Herpesvirus）的傳染性喉氣管炎病毒（Infectious?Laryngotracheitis?virus，ILTV）引起的一種急性呼吸道傳染病，可引起雞死亡和產蛋下降，造成生產的嚴重損失。嚴重感染時病雞呼吸困難、喘氣、咳出血樣粘液，死亡率高。

ILT是家禽的第一個研制出有效疫苗的主要病毒性疾病。目前，疫苗免疫接種仍是我國控制家禽ILT的主要措施。盡管弱毒疫苗存在散毒的危險，但是目前主要還是使用弱毒疫苗來預防ILT，所使用的弱毒疫苗是經細胞傳代或雞胚傳代致弱的病毒以及經選擇的地方流行的溫和型毒株，他們都能使易感雞產生堅強的免疫力，但弱毒疫苗存在毒力偏強、易于返祖、并且與強毒株一樣能形成潛伏感染等弊端。弱毒疫苗的接種方法主要有點眼、噴霧和飲水等方式。實際應用中的弱毒疫苗的病毒毒力普遍偏強，接種后雞群發病率在5％左右，而進一步致弱的疫苗株其免疫原性也下降，進而導致免疫效果不佳。

粘膜免疫和粘膜疫苗具有許多引人關注的特性，然而要真正通過抗原的粘膜免疫途徑刺激產生強大的粘膜免疫反應（包括粘膜特異的sIgA和CTLs）和保護效應并非那么容易。目前只有極少數幾種粘膜免疫途徑的疫苗用于臨床。有效的佐劑可以大大加強疫苗刺激機體有效的保護性免疫應答，而研發新型粘膜疫苗配方的一個最明顯的限制在于缺乏有效的佐劑。因此，篩選合適免疫佐劑，研制新型ILT疫苗，增強疫苗免疫效力，成為研制傳染性喉氣管炎粘膜疫苗的重點。

發明內容

為了克服現有佐劑效果差的問題，本發明提供一種傳染性喉氣管炎粘膜疫苗，該傳染性喉氣管炎粘膜疫苗使用鞭毛素作為佐劑。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種傳染性喉氣管炎粘膜疫苗，包含滅活的傳染性喉氣管炎病毒和鞭毛素。

作為本發明傳染性喉氣管炎粘膜疫苗的一種優選實施方式，所述鞭毛素為大腸桿菌源鞭毛素。

作為本發明傳染性喉氣管炎粘膜疫苗的一種優選實施方式，所述傳染性喉氣管炎病毒為傳染性喉氣管炎病毒疫苗株K317。

一種傳染性喉氣管炎粘膜疫苗的制備方法，包括以下步驟：

步驟1：將傳染性喉氣管炎病毒用10日齡SPF雞胚進行培養和傳代；

步驟2：將傳染性喉氣管炎病毒進行滅活；

步驟3：將大腸桿菌源鞭毛素在原核表達系統中表達，純化，去內毒素；

步驟4：將大腸桿菌源鞭毛素與滅活的傳染性喉氣管炎病毒進行混合制成傳染性喉氣管炎粘膜疫苗。

作為本發明傳染性喉氣管炎粘膜疫苗的制備方法的一種優選實施方式，所述步驟1中的傳染性喉氣管炎病毒為疫苗株K317。

作為本發明傳染性喉氣管炎粘膜疫苗的制備方法的一種優選實施方式，所述步驟2中的滅活采用的是熱處理，樣品置65℃水浴或者65℃培養箱中放置2h滅活。

作為本發明傳染性喉氣管炎粘膜疫苗的制備方法的一種優選實施方式，所述步驟2還包括病毒的活性檢測和細菌檢測。

作為本發明傳染性喉氣管炎粘膜疫苗的制備方法的一種優選實施方式，所述步驟3中選用的鞭毛素來源于大腸桿菌。

本發明傳染性喉氣管炎粘膜疫苗在制備預防傳染性喉氣管炎的藥物中的應用。

本發明提供的新型的傳染性喉氣管炎粘膜疫苗具有明顯的優點和效果。

（1）傳染性喉氣管炎粘膜疫苗能引起機體免疫系統產生強型應答，免疫力強，持續時間長，可以作為預防傳染性喉氣管炎。

（2）由于該新型疫苗的抗原是滅活病毒，安全、不存在散毒的危險。

（3）和一般的滅活疫苗比較，通過添加鞭毛素作為粘膜免疫佐劑，激發內在免疫應答，同時增強目標靶點對疫苗抗原產生的抗體反應，有效誘導機體免疫系統產生免疫保護反應，預防家禽傳染性喉氣管炎。

附圖說明

圖1滅活病毒接胚后活性檢測結果；第一泳道為DL2000?Marker；第二和三泳道為陽性對照；第四和五泳道為檢測樣品。

圖2重組蛋白的可溶性分析結果；第一泳道為pET-His-Flagellin誘導表達上清；第二泳道為pET-His-Flagellin誘導表達沉淀。