[發明專利]一種冬蟲夏草原草粉的高純基因組DNA提取方法無效
| 申請號: | 201210506674.X | 申請日: | 2012-12-03 |
| 公開(公告)號: | CN103232995A | 公開(公告)日: | 2013-08-07 |
| 發明(設計)人: | 程池;扎西才吉;李輝;姚粟;劉洋;張欣;白飛榮 | 申請(專利權)人: | 中國食品發酵工業研究院;玉樹藏族自治州三江源藥業有限公司 |
| 主分類號: | C12N15/10 | 分類號: | C12N15/10;C12R1/645 |
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| 地址: | 100027*** | 國省代碼: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 冬蟲夏草 原草粉 高純 基因組 dna 提取 方法 | ||
1.一種冬蟲夏草原草粉的高純基因組DNA提取方法,依次包括如下步驟:?
(1)取冬蟲夏草原草粉,置于無菌的研缽中;?
(2)加入液氮迅速研磨至粉末;?
(3)將研磨后的粉末過篩;?
(4)將過篩后的粉末轉移到1.5ml的離心管中,加入裂解液進行裂解處理;?
(5)在裂解處理后的樣品中加入等體積的氯仿異戊醇(24∶1),離心抽提;?
(6)取上清液,加入RNA酶處理;?
(7)加入蛋白酶K處理;?
(8)重復步驟(6);?
(9)取上清液,異丙醇沉淀DNA;?
(10)70%預冷乙醇洗滌脫鹽2次;?
(11)純化DNA。
2.如權利要求1的方法,其中步驟(1)取0.25g原草粉。?
3.如權利要求1的方法,其中步驟(2)液氮研磨的時間控制在10s以內。?
4.如權利要求1的方法,其中步驟(3)將研磨后的粉末過120目篩。?
5.如權利要求1的方法,其中步驟(4)加入裂解液組成為:2%CTAB(十六烷基三甲基溴化銨)、100mM?Tris-HCl(三(羥甲基)氨基甲烷鹽酸鹽)pH8.0、1.4M?NaCl(氯化鈉)、20mM?EDTA(乙二胺四乙酸二鈉)、1.5%polyvinyl-pyrrolidone,PVP(聚乙烯吡咯烷酮)、0.5%2-mercaptoethanol(β巰基乙醇)。?
6.如權利要求1的方法,其中步驟(4)加入裂解液700μl,并置于水浴鍋中65℃恒溫處理30min。?
7.如權利要求1的方法,其中步驟(5)離心轉速為13000rpm,離心時間為10min。?
8.如權利要求1的方法,其中步驟(6)加入的RNA酶終濃度為60μg/ml,處理條件為37℃,30min。
9.如權利要求1的方法,其中步驟(7)加入的蛋白酶K終濃度為120μg/ml。處理條件為37℃,30min。?
10.如權利要求1的方法,其中步驟(9)中加入的異丙醇體積為上清液體積的0.8倍,4℃沉淀15min后,13000rpm離心2min。?
11.如權利要求1的方法,其中步驟(10)中加入的70%預冷乙醇體積為500μl。?
12.如權利要求1的方法,其中步驟(11)中采用OMEGA公司生產的DNA純化試劑盒進行純化。?
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