技術領域

本發明涉及酶聯免疫分析法直接標記抗原檢測丙型肝炎病毒抗原抗體及檢測試劑盒，屬于酶聯免疫分析法以及體外診斷檢測領域。

背景技術

丙型肝炎病毒(Hepatitis?C?virus,HCV)呈球形，直徑小于80nm（在肝細胞中為36～40nm，在血液中為36-62nm），為單股正鏈RNA病毒，在核衣殼外包繞含脂質的囊膜，囊膜上有刺突。丙型肝炎病毒可引起丙型肝炎主要經輸血，針刺，吸毒等傳播。HCV感染通常是持續性的終生感染，抗體檢測是一個非常有效的方法。但因感染HCV后,抗HCV出現較慢，一般情況下，抗體的血清學轉換可以延遲到暴露后幾個月才發生，此時可發生抗HCV的假陰性(也就是說在抗體可檢出之前或在血清學轉換之中即所謂的“窗口期”)，故在早期診斷丙肝感染上有困難。HCV核心抗原檢出時間早于抗體，HCV-cAg檢測可作為HCV抗體檢測的補充試劑。

目前丙型肝炎的檢測方法主要有三類:1.丙型肝炎抗體檢測:其缺點是感染丙型肝炎病毒HCV后，有2-26周的潛伏期，一般到抗HCV抗體出現(轉陽)有一個較長的窗口期，平均為70d，有的患者窗口期可延長至6-9個月或更長。由于窗口期的存在，對潛伏期和隱形感染者容易造成漏檢，機體感染HCV后，在抗HCV抗體出現之前約2周左右，血循環中即可出現病毒顆粒，此時丙型肝炎病毒HCV的RNA經PCR方法檢測可為陽性，血液具有感染性，而用抗體檢測方法根本無法測出。2.丙型肝炎病毒HCV核酸檢測:感染丙型肝炎病毒HCV后1-2周，血清中即可檢測到HCV-RNA。因此，HCV核酸檢測(HCV?RT-PCR檢測)可用于丙型肝炎的早期診斷，并且通過對病毒拷貝數的定量檢測可對其臨床療效進行監測。因為PCR法檢測HCV-RNA影響因素較多，在樣本收集、儲存和檢測方面都有嚴格的要求，并且PCR的檢測操作過程復雜、費時。3.丙型肝炎抗原檢測:丙型肝炎病毒HCV核心抗原是由HCV基因中最為保守的部分編碼而來，在HCV-RNA出現后的1-2d內即出現丙型肝炎病毒HCV抗原，且與HCV-RNA的水平相平行，可以作為HCV復制的標志。有研究表明，HCV抗原檢測與抗HCV抗體檢測相比，HCV抗原的檢測可使檢測的窗口期平均提前49天，縮短窗口期HCV感染者的獻血的風險。與RT-PCR方法相比具有操作簡便、時間短、對環境要求低的特點，在臨床上可用于早期急性丙型肝炎診斷。

發明內容

本發明的目的是提供一種酶聯免疫分析法直接標記抗原檢測丙型肝炎病毒抗原抗體及檢測試劑盒，主要解決現有技術存在的靈敏度低、穩定性差、操作煩瑣及污染環境等技術問題。最主要解決的問題是縮短窗口期，可用于早期急性丙型肝炎診斷。

本發明采用酶聯免疫分析法，聯合檢測丙型肝炎病毒抗原抗體。該發明建立雙抗夾心的基礎之上，在這里，樣品中的抗原抗體首先被包被于微孔板上的抗丙型肝炎病毒抗原單克隆抗體AbI、丙型肝炎病毒重組抗原AgI捕獲。在洗掉樣品的其它部分，再加入HRP標記物（HRP標記抗丙型肝炎病毒抗原單克隆抗體AbII、丙型肝炎病毒重組抗原AgII），就可以形成單克隆抗體AbI-丙型肝炎病毒抗原-單克隆抗體AbII?HRP標記物復合物與重組抗原AgI-丙型肝炎病毒抗體-重組抗原AgII??HRP標記物復合物，洗板加入顯色液A、顯色液B以及加入終止液后，用酶聯免疫分析儀測量吸光值，吸光值與樣本中抗原抗體總濃度呈正相關，與臨界值相比較，從而判斷陰陽性。

與現有技術相比，本發明具有以下突出優點:

1.?本發明采用丙型肝炎抗原抗體聯合檢測大大縮短窗口期。現階段丙型肝炎的檢測一般是檢測丙型肝炎抗體:其缺點是感染丙型肝炎病毒后，有2-26周的潛伏期，一般到抗HCV抗體出現(轉陽)有一個較長的窗口期，平均為70d，有的患者窗口期可延長至6-9個月或更長。由于窗口期的存在，對潛伏期和隱形感染者容易造成漏檢。本發明采用丙型肝炎抗原檢測，丙型肝炎病毒HCV核心抗原是由HCV基因中最為保守的部分編碼而來，在HCV-RNA出現后的1-2d內即出現丙型肝炎病毒HCV抗原，且與HCV-RNA的水平相平行，可以作為HCV復制的標志。有研究表明，HCV抗原檢測與抗HCV抗體檢測相比，HCV抗原的檢測可使檢測的窗口期平均提前49天，縮短窗口期HCV感染者的獻血的風險。本發明應用聯合檢測能夠將抗原與抗體檢測的優勢據發揮出來，且本發明具有操作簡便、時間短、對環境要求低的特點，在臨床上可用于早期急性丙型肝炎診斷。

2.本發明是采用最普遍的酶聯免疫分析法，此法目前已普及，優勢在于操作簡單、適合于大批量標本的測定，且成本低廉。其靈敏度也很好。加入終止液后顯色穩定。