技術領域

本發明涉及生物物質檢測分析領域，特別涉及一種乙肝病毒前S1抗原檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

乙型病毒性肝炎是嚴重危害我國人民身體健康的傳染病。長期以來，檢測乙型肝炎病毒的血清標志物主要為乙肝“兩對半”指標。但它不能完全反映HBV在患者體內的復制與傳染性情況。由于其檢測方法的靈敏度、特異性的限制以及HBV為逃避宿主的免疫反應常發生變異，往往導致“兩對半”檢測結果的誤讀。HBV?DNA檢測是HBV復制最直接的指標，但此方法對實驗室條件要求嚴格，不易推廣，特別是廣大基層醫療單位還難以開展。HBV前-S1抗原與乙肝DNA的復制密切相關。HBV前S1蛋白的定量檢測與HBV?DNA的檢測有良好的一致性，是反映HBV復制活躍的可靠指標，可以作為HBV感染、復制和乙肝患者診斷、治療和預后的重要標志物，適合于各級醫院開展。檢測前S1抗原可避免由于病毒變異或其他因素造成的HBeAg假陰性的影響，協助臨床醫生對病情做出正確的判斷，有效地指導臨床抗病毒治療。所以，前S1蛋白已成為臨床檢測乙型肝炎病毒感染和復制程度的又一血清標志物，可做為臨床上對乙肝的病毒篩查、病情判斷和抗病毒療效監控的重要補充手段。

化學發光免疫檢測技術是在酶標記和免疫反應相結合的基礎上，引入化學發光物為底物，通過測定光信號來判斷檢測結果。其利用化學反應釋放的自由能激發中間體，使其從激發態回到基態，當中間體從激發態回到基態時會釋放等能級的光子，對光子進行測定而進行定量分析，該檢測方法具有很高的靈敏度。

現有技術中雖然有將化學發光檢測應用于乙肝病毒檢測的技術，但現有技術中存在產品精度低和穩定性差的問題。

發明內容

本發明實施例提供一種乙肝病毒前S1抗原檢測試劑盒及其制備方法，本發明提供的產品檢測簡便、快速、靈敏、穩定及重復性好。

本發明提供的乙肝病毒前S1抗原檢測試劑盒，包括乙肝病毒前S1抗原陰性對照品和乙肝病毒前S1抗原陽性對照品、乙肝病毒前S1抗體包被微孔板、酶標記抗乙肝病毒表面抗原抗體的標記結合物、化學發光底物液和濃縮洗滌液，其特征在于包被濃度為2.5μg/mL。

乙肝病毒前S1抗原陰性對照品為采用10份正常人的血清混勻后制得，乙肝病毒前S1抗原陽性對照品為臨床乙肝病毒前S1抗原陽性血清稀釋后制得。

標記結合物為辣根過氧化物酶標記的抗乙肝病毒表面抗原抗體，稀釋倍數為1∶2500。

化學發光底物液為魯米諾化學發光底物液，包括底物A液和底物B液，其中底物A液包括1.8g/L的魯米諾和0.2g/L的對碘苯酚，底物B液包括0.5g/L的過氧化脲。

濃縮洗滌液為30倍濃縮洗滌液，具體為加入濃度為1.5g/L的吐溫-20和體積比為0.05％的PC300防腐劑的0.3M?pH7.4的磷酸鹽緩沖液。

本發明提供的乙肝病毒前S1抗原檢測試劑盒的制備方法包括：

制備乙肝病毒前S1抗原陰性對照品和乙肝病毒前S1抗原陽性對照品；

制備乙肝病毒前S1抗體包被的包被微孔板；

制備標記結合物，所述標記結合物為酶標記的抗乙肝病毒表面抗原抗體；

制備化學發光底物液；以及

制備濃縮洗滌液；

其中，制備乙肝病毒前S1抗體包被的包被微孔板包括：用包被液將乙肝病毒前S1單克隆抗體稀釋成包被濃度為2.5μg/mL，以每孔100μl加入微孔板，然后置于4℃冰箱48小時；棄去微孔板中的包被液，然后每孔加入150μl的封閉液，置于4℃冰箱封閉24小時；棄去封閉液后，置于37℃孵育箱8小時烘干。

制備乙肝病毒前S1抗原陰性對照品和乙肝病毒前S1抗原陽性對照品包括：

采用10份正常人的血清混勻后制得所述乙肝病毒前S1抗原陰性對照品；臨床乙肝病毒前S1抗原陽性血清稀釋后制得所述乙肝病毒前S1抗原陽性對照品。

標記結合物為通過戊二醛二步法制得的辣根過氧化物酶標記抗乙肝病毒表面抗原單克隆抗體的稀釋液，稀釋濃度為1∶2500。

化學發光底物液為魯米諾化學發光底物液，包括底物A液和底物B液；底物A液用0.05M?pH8.6的Tris-HCl緩沖液溶解魯米諾和對碘苯酚制得，其中魯米諾濃度為1.8g/L，對碘苯酚濃度為0.2g/L；底物B液用0.05M?pH8.6的Tris-HCl緩沖液稀釋過氧化脲制得，其中過氧化脲的濃度為0.5g/L。