技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及適于轉(zhuǎn)化細胞的載體、重組細胞及其用途。更具體地，本發(fā)明提供了一組適于轉(zhuǎn)化細胞的載體、兩種適于轉(zhuǎn)化細胞的載體、一種重組細胞及其制備方法、一種檢測樣本中二惡英的方法、一種用于檢測樣本中二惡英化合物的試劑盒、一種用于檢測樣本中二惡英化合物的系統(tǒng)以及一種篩選具有降解二惡英化合物活性的制劑的方法。

背景技術(shù)

二惡英類物質(zhì)，是包括多氯代二苯并二惡英（polychlorinated?dibenzo-dioxins,PCDDs）、多氯代二苯并呋喃（polychlorinated?dibenzo-furans,PCDFs）和共平面多氯聯(lián)苯（co-planar?polychlorinated?biphenyls,Co-PCBs）等一大類化合物的總稱(Larsen?et?al,2000)，且這三類化合物分別有75種、135種、209種異構(gòu)體。二惡英類污染物主要來源于有機物焚燒過程和農(nóng)藥、化工生產(chǎn)過程的副產(chǎn)物。因其毒性極強，自然條件下極難降解，生物蓄積性高，并對人體內(nèi)分泌、生殖和發(fā)育、神經(jīng)和免疫系統(tǒng)等都有重要影響，因此1997年被世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)認定為人類一級致癌物。

二惡英類物質(zhì)是一類全球性持久性有機污染物，普遍存在于大氣、水體、沉積物和土壤等環(huán)境介質(zhì)中。環(huán)境介質(zhì)中二惡英類物質(zhì)的含量極低，其分析屬于超痕量、多組分分析，一直被視為現(xiàn)代有機分析的難點。

目前，對二惡英化合物進行檢測的方法主要有化學檢測方法和生物檢測法。其中化學檢測法HRGC/HRMS，雖然能夠精確地將二惡英的所有成分濃度分析出來，但是整個分析測試過程費用高耗時長（檢測周期>7天/樣，檢測成本/1.5萬元），不利于日常檢測和毒性急性的快速篩查。生物檢測法，包括酶聯(lián)免疫法（(enzyme?immunoassay，EIA)、熒光免疫分析法(dissociation-enhancement?lanthanide?fluoro?immunoassay，DELFIA)、酶活力誘導法(EROD)和熒光素酶報告基因法(chemical-activated?luciferase?gene?expression,CALUX)等。前三者由于實驗操作復雜、技術(shù)成熟度不高而難以推廣應(yīng)用。而CALUX法由于其準確度好、精密度高、操作簡便易行而被用于歐盟、美國和日本等29個國家的水環(huán)境、土壤、食品、飼料中二惡英的檢測分析和篩查。但是該法仍然有較高的假陽性，且對低濃度二惡英物質(zhì)感應(yīng)不靈敏，檢測成本高，耗時長。

因此，目前對二惡英類化合物進行檢測的方法仍有待改進。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一。為此，基于二惡英類化合物的毒性機制，本發(fā)明提供了適于轉(zhuǎn)化細胞的載體、重組細胞及其用途，以便改進現(xiàn)有的CALUX法。

根據(jù)本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明提供了一組適于轉(zhuǎn)化細胞的載體。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該組載體包括：第一載體和第二載體。其中，第一載體包含：第一核酸序列，該第一核酸序列包括編碼報告蛋白的序列，該報告蛋白具有可檢測的活性；以及二惡英響應(yīng)區(qū)域，該二惡英響應(yīng)區(qū)域包含二惡英應(yīng)答元件，并且二惡英響應(yīng)區(qū)域與第一核酸序列可操作地連接。第二載體包含：第二核酸序列，該第二核酸序列包含編碼芳香烴受體的序列。利用本發(fā)明的一組適于轉(zhuǎn)化細胞的載體，能夠有效地將編碼報告蛋白的序列、二惡英應(yīng)答元件以及編碼芳香烴受體的序列引入宿主細胞中，從而能夠有效地構(gòu)建重組細胞，進而，在二惡英的誘導下，重組細胞能夠啟動報告基因的轉(zhuǎn)錄和表達，由此，利用該重組細胞能夠通過所表達報告蛋白的活性的檢測，有效地實現(xiàn)對二惡英類化合物的檢測。

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了一種適于轉(zhuǎn)化細胞的載體。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該載體包括：第一核酸序列，該第一核酸序列包括編碼報告蛋白的序列，該報告蛋白具有可檢測的活性；以及二惡英響應(yīng)區(qū)域，該二惡英響應(yīng)區(qū)域包含二惡英應(yīng)答元件，并且二惡英響應(yīng)區(qū)域與第一核酸序列可操作地連接。利用該載體，能夠有效地將編碼報告蛋白的序列和二惡英應(yīng)答元件引入宿主細胞中，其中報告基因的轉(zhuǎn)錄和表達以及表達量是檢測二惡英類化合物的指示，而二惡英應(yīng)答元件是誘導報告基因表達的必要條件，因此，該載體適于轉(zhuǎn)化細胞，能夠用于構(gòu)建檢測二惡英類化合物的重組細胞。