技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種人血清淀粉樣蛋白A1及其制備方法和應用。

背景技術(shù)

血清淀粉樣蛋白A(Serum?Amyloid?A，SAA)是機體受到感染和損傷時分泌的一種主要的急性期蛋白。SAA是一個多態(tài)性蛋白的總稱，由相關(guān)但各具獨立基因的蛋白(SAA1-SAA4)組成。其中，人血清淀粉樣蛋白A1(SAA1)由104個氨基酸組成，主要由肝細胞合成，人SAA2與人SAA1有7個氨基酸的差別，它們均為急性期蛋白，在炎癥反應中作用相近。人SAA3是一個假基因，人SAA4在急性期反應中變化不大，在機體中持續(xù)少量產(chǎn)生。

研究表明，SAA1在急性和慢性炎癥患者血清內(nèi)含量均有變化，因此是一個反映感染性和非感染性炎癥疾病的重要生物檢測指標。SAA1不僅是慢性阻塞性肺病急性加重期的生物標志物，也是急性心梗患者在接受急診冠狀動脈介入手術(shù)后發(fā)生心臟破裂的預期因子，這為早期發(fā)現(xiàn)心臟破裂患者提供了重要參考指標。其他大量研究也表明，在胰腺炎、肝炎、冠心病、糖尿病、慢性腎臟疾病、類風濕性關(guān)節(jié)炎及肥胖病例中，SAA1升高與疾病活動和病程發(fā)展有非常密切的關(guān)系。目前臨床研究還認為，所有急性期反應蛋白中，SAA1對急性炎癥反應最敏感，升值幅度最大。同時研究還表明SAA1與甲胎蛋白等腫瘤相關(guān)蛋白相似，其在血清中的濃度與癌癥發(fā)生呈正相關(guān)。因此，在臨床上對SAA1在病人血清中含量的檢測具有輔助診斷價值。

同時，SAA1不僅是一種簡單的炎癥標志物，還積極介入疾病的相關(guān)過程。在急性感染或者炎癥發(fā)生時，血清內(nèi)SAA1的水平可提升1000倍。高水平的SAA1將導致淀粉樣病變，而且低密度脂蛋白LDL與SAA1的結(jié)合物(LDL-SAA)可提高心血管疾病的風險；同時，SAA1還具有促炎反應的特性，促進多種細胞因子的分泌，如IL-1β，IL-6，基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix?metalloproteinases，MMPs)，CCL20等，這些細胞因子都參與炎癥導致的疾病的發(fā)病過程，如，風濕性關(guān)節(jié)炎，肌肉萎縮，痛風，動脈粥樣硬化等。由于SAA1與多種疾病的發(fā)生相關(guān)，針對SAA1的治療方法已越來越受到重視。

目前，已知SAA1與四種受體結(jié)合，Toll樣受體(Toll-like?receptors，TLR)包括TLR2和TLR4，CD36(B類清道夫受體，a?class?B?scavenger?receptor)，及其G蛋白偶聯(lián)受體甲酰肽受體2/脂氧素A4受體(formyl?peptide?receptor?2/lipoxin?A4?receptor，F(xiàn)PR2/LXA4R)。SAA1與不同的受體結(jié)合所發(fā)揮的生物學活性不一樣，例如，SAA1與甲酰肽受體2結(jié)合可誘導滑液超常增生及其內(nèi)皮細胞的增殖，從而導致類風濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生；SAA1與CD36結(jié)合可促進膽固醇的代謝；SAA1與TLR2結(jié)合可產(chǎn)生炎癥誘發(fā)因子，導致動脈粥樣硬化等疾病；SAA1與TLR4結(jié)合可誘導NO的產(chǎn)生。

由此可見，SAA1在機體中發(fā)揮多種生物學活性。目前，SAA1均采用大腸桿菌表達獲得，結(jié)合了革蘭氏陰性菌細胞壁上的脂多糖即LPS，由于SAA1與脂多糖及其脂類有極強的結(jié)合作用，一旦結(jié)合就難于分離，難以獲得不含脂多糖的SAA1。

此外，本領(lǐng)域還需要開發(fā)能夠抑制天然SAA活性的物質(zhì)，用于治療SAA過高所造成的炎癥及其疾病。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于，提供一種新型的hSAA1的制備方法，獲得的hSAA1不受脂多糖干擾，并對其生物學功能進行研究。

本發(fā)明的第一方面，提供一種重組人血清淀粉樣蛋白A1，所述重組人血清淀粉樣蛋白A1為以酵母為宿主所表達的重組人血清淀粉樣蛋白A1。

在另一優(yōu)選例中，所述重組人血清淀粉樣蛋白A1具有以下一個或多個特征：

(a)分子量為12～14KD的單體；

(b)抑制天然人血清淀粉樣蛋白A的活性；

(c)具有抑制炎性細胞因子表達的能力。

在另一優(yōu)選例中，所述炎性細胞因子包括IL-6、IL-1β、TNF-α、IL-12、MMP9。

本發(fā)明的第二方面，提供一種人血清淀粉樣蛋白A1的多聚體，所述多聚體為第一方面所述的重組人血清淀粉樣蛋白A1的多聚體。

在另一優(yōu)選例中，所述多聚體具有以下一個或多個特征：

(a)所述多聚體是二聚體，三聚體、四聚體或其組合；

(b)抑制天然人血清淀粉樣蛋白A的活性；

(c)具有抑制炎性細胞因子表達的能力。