[發明專利]一種神經細胞的凍存液及凍存方法無效
| 申請號： | 201210023539.X | 申請日： | 2012-02-02 |
| 公開（公告）號： | CN102578078A | 公開（公告）日： | 2012-07-18 |
| 發明（設計）人： | 孫晶 | 申請（專利權）人： | 溫州醫學院附屬第二醫院 |
| 主分類號： | A01N1/02 | 分類號： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 北京匯澤知識產權代理有限公司 11228 | 代理人： | 武君 |
| 地址： | 325035 *** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 神經細胞 凍存液 方法 | ||
1.一種神經細胞的凍存液，其特征在于，所述凍存液包括基礎培養基、胎牛血清、二甲基亞砜、6-磷酸果糖和黃酮類物質，其中各組分的重量比為：
基礎培養基20-70重量份
胎牛血清20-50重量份
二甲基亞砜3-8重量份
6-磷酸果糖0.1-1重量份
黃酮類物質0.1-1重量份；
其中，所述基礎培養基為Eagle＇s?MEM、DMEM、F12、或DMEM與F12的按1：1的重量比的混合培養基。
2.?根據權利要求1所述的神經細胞的凍存液，其特征在于，所述黃酮類物質為：4',5,7-三羥基黃酮、5,?6-二羥基-7,?4'-二甲氧基黃酮、5，8，2'-三烴基-7-甲氧基黃酮或3',4',5,7-四羥基黃烷酮。
3.一種神經細胞的凍存液的制備方法，將所述各組分混合搖勻即成。
4.一種使用權利要求1所述的神經細胞的凍存液的神經細胞凍存方法，包括以下步驟：
A．凍存液制備：制備如權利要求1所述的神經細胞凍存液；
B．細胞懸液制備：培養生長成單層的神經細胞一瓶，0.25%胰蛋白酶液消化3分鐘，棄胰酶液，加入RPMI-1640培養液10ml，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，離心4000轉/分，棄上清，加入步驟A凍存液2ml，混均，置入無菌的凍存管內；
C．冷凍：先將凍存管在0℃下凍存30min，然后放入-30℃凍存1h，再放入-80℃凍存4h，最后移入液氮罐中保存；
D．細胞復蘇：取出凍存管快速置于37℃水浴1-2min，震蕩直至細胞懸液完全融化，然后用10倍Hanks液稀釋，1000r/min離心5min，離心，去除上清液，再重復3次。
5.根據權利要求4所述的神經細胞凍存方法，其特征在于，所述細胞懸浮濃度為1×108細胞/ml～5×1010細胞/ml，以深低溫保藏。
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