[發明專利]凝血因子的純化有效
| 申請號： | 201180006396.5 | 申請日： | 2011-01-18 |
| 公開（公告）號： | CN102939299A | 公開（公告）日： | 2013-02-20 |
| 發明（設計）人： | J.R.布杰爾克 | 申請（專利權）人： | 諾沃—諾迪斯克保健股份有限公司 |
| 主分類號： | C07K1/22 | 分類號： | C07K1/22;C07K14/745 |
| 代理公司： | 中國專利代理(香港)有限公司 72001 | 代理人： | 孔青;郭文潔 |
| 地址： | 瑞士*** | 國省代碼： | 瑞士;CH |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 凝血 因子 純化 | ||
1.?一種方法，所述方法用于從包含蛋白質/多肽種類的混合物的樣品中將具有不同γ-羧基谷氨酸含量的蛋白質/多肽的組合物純化為具有所需γ-羧基谷氨酸含量的蛋白質/多肽，所述蛋白質/多肽種類具有不同的γ-羧基谷氨酸含量，所述方法包括以下步驟：
(a)?將所述蛋白質/多肽樣品加入免疫親和色譜材料中，所述免疫親和色譜材料與針對γ-羧基谷氨酸的結合部分偶聯；
(b)?洗脫所述蛋白質/多肽；和
(c)?選擇獲自所述洗脫的級分，其中所述級分中的蛋白質/多肽具有所需的γ-羧基谷氨酸含量；
其特征在于，所述樣品中蛋白質/多肽的總濃度超過所述免疫親和色譜材料的結合能力。
2.?權利要求1闡述的方法，其中所述蛋白質/多肽為因子IX。
3.?前述權利要求中任一項的方法，其中超過所述免疫親和色譜材料結合能力的大于100、105、110、115、120、125、130、140、150、200、250、500、750或1000%中的任一個，特別地大于120%、或大于150%、或大于250%。
4.?權利要求3闡述的方法，其中超過所述免疫親和色譜材料結合能力的100-400%，例如100-200%，特別為100-150%。
5.?權利要求1-4的方法，其中所述方法包括選擇獲自所述洗脫的級分，與純化樣品中因子IX的#1-11-Gla和/或#1-12-Gla形式的比例相比，所述級分中因子IX的#1-11-Gla和/或#1-12-Gla形式的比例增加。
6.?權利要求5的方法，其中所述方法包括選擇獲自所述洗脫的級分，與純化樣品中因子IX的#1-10-Gla形式的比例相比，所述級分中因子IX的#1-10-Gla形式的比例降低。
7.?前述權利要求中任一項的方法，其中所述洗脫緩沖液和/或平衡緩沖液具有5.0至8.0之間的pH，例如7.5。
8.?前述權利要求中任一項的方法，其中氯化鈉以10?mM至100?mM之間的濃度，例如50?mM存在于洗脫緩沖液中。
9.?前述權利要求中任一項的方法，其中針對Gla的結合部分包含Gla-定向抗體。
10.?權利要求9的方法，其中在鈣、鎂或其它二價陽離子存在時所述抗體對Gla結構域的折疊敏感和/或所述抗體識別包含特異性Gla殘基的表位。
11.?權利要求9的方法，其中所述Gla-定向抗體包含3F14A3B6(SEQ?ID?NOS：1和2)。
12.?前述權利要求中任一項的方法，其中所述免疫親和材料包含瓊脂糖珠，例如預-活化的瓊脂糖珠，特別為CNBr-Sepharose?4?FF。
13.?前述權利要求中任一項的方法，其中所述平衡緩沖液和洗滌緩沖液額外地包含鈣離子，例如氯化鈣。
14.?權利要求13的方法，其中所述鈣離子以大于0.5?mM?(例如，大于0.5、1.0、1.5或2.0?mM氯化鈣，例如3.0、5.0、8.0或10.0?mM氯化鈣，特別地2或5?mM氯化鈣)的濃度存在，或所述鈣離子以0.5-10?mM、1-8?mM、1-5?mM、和2-5?mM的范圍存在。
15.?前述權利要求中任一項的方法，其中基于免疫親和的超載方法可與第二步驟組合，在第二步驟中使用基于陰離子色譜的方法進一步分離/純化Gla種類。
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