技術領域

本發(fā)明涉及一種人肺癌細胞株及其制備方法，尤其是一種來源于人肺腺癌的細胞株及其制備方法。

背景技術

腫瘤是嚴重危害人類健康的主要疾病之一，世界衛(wèi)生組織發(fā)表的一項研究報告表明，全球癌癥狀況將日益嚴重，因此，深入研究腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的分子機制，尋找更為有效的腫瘤治療方案，成為當今醫(yī)學研究的前沿課題。隨著腫瘤生物學研究的不斷深入，腫瘤的早期診斷及預防水平有了較大的提高，但是腫瘤治療后的高轉(zhuǎn)移及高復發(fā)仍是腫瘤臨床治療中一個亟待解決的難題。近年來，“腫瘤干細胞”學說的提出及其研究進展，從一個全新的角度去認識腫瘤。該學說認為，腫瘤中存在一部分獨特的具有自我更新和分化功能的干細胞樣亞群并將之稱為腫瘤干細胞，這一亞群細胞正是腫瘤的起源細胞并維持腫瘤的生長。因此，腫瘤細胞株是研究細胞癌變機理、腫瘤轉(zhuǎn)移、腫瘤放療和化療敏感性分子基礎等生物醫(yī)學問題的重要材料，建立和鑒定不同的腫瘤細胞株是一項很有意義的工作。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種來源于人肺腺癌的細胞株，所述細胞株具有典型的腫瘤細胞生物學特性；同時，還提供一種所述細胞株的制備方法。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術方案為：一種來源于人肺腺癌的細胞株，命名為人肺癌細胞株1015，保藏號為CCTCC?NO：C201030。

所述細胞株1015在倒置光學相差顯微鏡下觀察，可見細胞體積大，核大，胞漿豐富，細胞間連接緊密，與平皿之間緊密貼附。

所述細胞株的體外倍增時間為33.325h。

本發(fā)明所述人肺癌細胞株1015，是一株中國南方人肺腺癌細胞系，來源于一位52歲男性肺癌病人的左下肺癌病灶。病人在接受手術前未接受任何化療、放療及靶向治療等治療。

一種來源于人肺腺癌的細胞株的制備方法，包括以下步驟：

(1)組織塊機械解離：將切除的人肺腺癌組織解離，清洗去除雜質(zhì)，分離肺癌實質(zhì)組織，去除正常肺泡及支氣管組織和間質(zhì)組織后，得到剩余的組織；

(2)膠原酶消化：將步驟(1)得到的剩余的組織切成組織片，清洗，然后向組織片加入膠原酶，孵育，過濾，然后收集腫瘤細胞，進行接種培養(yǎng)，得到存活細胞；

(3)對步驟(2)得到的存活細胞進行純化，去除纖維細胞等雜質(zhì)，純化后的肺癌細胞連續(xù)培養(yǎng)并傳代大于12個月，即得細胞株。

作為本發(fā)明所述制備方法的優(yōu)選實施方式，所述制備方法包括以下步驟：

(1)組織塊機械解離：將切除的人肺腺癌組織解離，清洗去除粘液和紅細胞等雜質(zhì)，分離肺癌實質(zhì)組織，去除正常肺泡及支氣管組織和間質(zhì)組織后，得到剩余的組織；

(2)膠原酶消化：將步驟(1)得到的剩余的組織切成1mm³的組織片，清洗組織片，讓組織片沉淀，去除上清液，把剩余組織再細切，清洗組織碎片，然后向組織片加入膠原酶，在37℃下孵育4-18小時；過濾，然后收集腫瘤細胞，在含20％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基中懸浮細胞，進行接種培養(yǎng)，得到存活細胞；

(3)對步驟(2)得到的存活細胞進行純化，去除纖維細胞等雜質(zhì)，純化后的肺癌細胞在含20％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng)并傳代大于12個月，即得細胞株。

作為本發(fā)明所述制備方法的優(yōu)選實施方式，所述步驟(1)為：將切除的人肺腺癌組織解離成0.5cm³，用100％的青-鏈霉素雙抗溶液浸泡移至生物安全柜，用消毒的PBS緩沖液反復清洗組織去除粘液和紅細胞等雜質(zhì)，再浸泡于培養(yǎng)基中移至解剖顯微鏡下，用兩個10號注射器針頭分離肺癌實質(zhì)組織，并去除正常肺泡及支氣管組織和間質(zhì)組織后，得到剩余的組織。

作為本發(fā)明所述制備方法的優(yōu)選實施方式，步驟(2)為：使用無菌的解剖刀和剪子把步驟(1)得到的剩余的組織切成1mm³的組織片，用PBS緩沖液清洗組織片，讓組織片沉淀，去除上清液，用無菌解剖刀和剪子把剩余組織再細切，用PBS清洗組織碎片數(shù)次，然后加入膠原酶(50-200單位/ml，溶解在PBS中)，在37℃下孵育4-18小時，通過無菌不銹鋼絲網(wǎng)或尼龍網(wǎng)過濾細胞懸液，然后收集腫瘤細胞，在含20％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基中懸浮細胞，進行接種培養(yǎng)，得到存活細胞。更優(yōu)選地，步驟(2)中，加入膠原酶的同時還加入有3mM的CaCl₂。加入CaCl₂可提高膠原酶對組織的解離效率。