【技術領域】

本發明涉及一種藥物的制備方法，尤其涉及一種西羅莫司粗晶的制備方法。

【背景技術】

西羅莫司(sirolimus)又稱雷帕霉素(rapamycin)，1975年，由加拿大Ayerst實驗室的Vezina等人從太平洋Easler島土壤樣品中分離的吸水鏈霉菌(Streptomyees?hygroscopicus)發酵液中首次得到。西羅莫司是一種親脂性含氮36元大環內酯類抗生素，分子式C₅₁H₇₉NO₁₃，分子量914.2，其結構式如下：

1977年Morris等人首先發現西羅莫司具有免疫抑制作用，1989年開始把西羅莫司作為治療器官移植的排斥反應的新藥進行使用。它是目前世界上最新的強效免疫抑制劑，它的免疫抑制活性比現行臨床廣泛使用的環孢素強數十倍，不但毒性低、用量小，而且與環孢素有協同免疫抑制作用，在臨床上西羅莫司與環孢素聯合使用。與環孢素和FK506(他克莫司)相比，西羅莫司是一種療效好、低毒、無腎毒性的免疫抑制劑。1991年，在酵母中發現了雷帕霉素的作用靶點并命名為“雷帕霉素靶點(TOR)”。其在哺乳動物中發現的唯一的同質體后來被克隆，稱為“哺乳類動物雷帕霉素靶點(mTOR)”。現在雷帕霉素不但作為器官移植抗排斥藥物和治療冠狀動脈再狹窄的支架涂層在臨床上應用，而且已經在實驗室中被證實可抑制許多癌細胞的生長，包括橫紋肌肉瘤、神經母細胞瘤、肺小細胞癌、骨癌、胰臟癌、白血病癌細胞及B細胞淋巴癌等。西羅莫司具有異構體B和異構體C，其中異構體B為主要活性成分，兩種異構體的結構式如下：

異構體B????????????????????????????異構體C

目前，西羅莫司主要由發酵的方法獲得，所得產物為黑褐色濃縮物，產物中除含有西羅莫司外還含未利用完的培養基、酸性化合物(如脂肪酸)、堿性物質(如生物堿，多肽，中性脂肪等脂溶性化合物)以及無機鹽等。西羅莫司在上述產物中的含量較低，一般從發酵液中提取到的黑褐色濃縮物為粘稠狀，其中所含西羅莫司的量低于20％，高效液相色譜(HPLC)測定純度低于85％，異構體B∶異構體C的比例低于10∶1。西羅莫司在液體狀態下易降解，在粘稠狀濃縮物中也不利于保存和運輸，因而人們一般都是將發酵所得的黑褐色濃縮物馬上純化成純度較高的西羅莫司晶體，以方便保存和運輸。然而黑褐色濃縮物要純化成西羅莫司晶體須經過柱層析等一系列繁雜的工序，才能得到西羅莫司晶體。

本發明提供了一種不需要繁雜工序即可制得西羅莫司粗晶的方法，且目前市場上未見西羅莫司粗晶形式的產品。

【發明內容】

本發明所要解決的技術問題在于提供一種西羅莫司粗晶的制備方法，不僅操作簡單，而且極大程度地提高了西羅莫司的純度和含量，提高了西羅莫司中異構體B與異構體C的比值。

本發明是通過以下技術方案解決上述技術問題的：一種西羅莫司粗晶的制備方法，將西羅莫司菌絲體的浸提液采用下述步驟進行操作：

(1)吸附：將西羅莫司菌絲體的浸提液減壓濃縮成濃縮物，接著濃縮物中加入固體吸附劑，并攪拌、靜置，然后傾瀝除去液體得到殘余物，其中，固體吸附劑加入量以所述浸提液的體積為標準，每升浸提液加入0.001～0.005kg固體吸附劑；

(2)萃取：加入浸提液體積的0.05～0.5倍的有機溶劑至經過(1)處理所得的殘余物中，并攪拌，然后過濾或離心除去固體，再將所得溶液靜置以使溶液分為水、有機溶液兩層，并除去水層以獲得有機溶液；

(3)洗滌濃縮：加入飽和食鹽水至經過(2)處理所得有機溶液中，飽和食鹽水與有機溶液的體積比為0.1～1∶1，對有機溶液進行洗滌，并除去水層，得到剩余物；再加無水硫酸鈉至上述剩余物中干燥3小時，然后過濾以獲得濾液，最后將濾液減壓濃縮，得黑褐色油狀物；

(4)洗滌：加非極性溶劑至經過(3)處理所得的油狀物中，并攪拌、靜置，然后除去非極性溶劑以獲得殘留物，其中，非極性溶劑與油狀物的體積比為0.5～3∶1；

(5)結晶：加結晶溶劑至經過(4)處理所得的殘留物中，并攪拌溶解，即獲得西羅莫司溶液，結晶溶劑與所述殘留物的體積比為0.5～3∶1；接著將西羅莫司溶液在室溫下放置2～10h，然后過濾除去液體，得到西羅莫司晶體；

(6)洗晶干燥：用所述結晶溶劑洗滌(5)中獲得的西羅莫司晶體三次，然后將洗滌后的西羅莫司晶體置于45℃下減壓干燥4h，即得產品；